发明名称 |
通过PEPC酶活性测定判断凤眼莲单株干重的方法及其应用 |
摘要 |
本发明涉及一种通过PEPC酶活性测定判断凤眼莲单株干重的方法及其应用,其特征在于,通过测定凤眼莲旺盛生长期内功能叶片的PEPC酶活性来判断其单株干重;所述的凤眼莲旺盛生长期是指每年的7~9月期间;所述的凤眼莲功能叶片材料是指:除去凤眼莲的心叶和最后一片衰老叶片后的其他叶片。在凤眼莲旺盛生长内,通过对凤眼莲的功能叶片的PEPC酶活性的测定获得的单株干重,确定凤眼莲规模化人工种养期收获的鉴定指标。 |
申请公布号 |
CN102353635B |
申请公布日期 |
2013.02.13 |
申请号 |
CN201110160189.7 |
申请日期 |
2011.06.15 |
申请人 |
江苏省农业科学院 |
发明人 |
李霞;丛伟 |
分类号 |
G01N21/31(2006.01)I;G01N21/33(2006.01)I |
主分类号 |
G01N21/31(2006.01)I |
代理机构 |
南京经纬专利商标代理有限公司 32200 |
代理人 |
孙忠浩 |
主权项 |
一种通过PEPC酶活性测定判断凤眼莲单株干重的方法,其特征在于,通过测定凤眼莲旺盛生长期内功能叶片的PEPC酶活性来判断其单株干重;所述的凤眼莲旺盛生长期是指每年的7~9月期间;所述的凤眼莲功能叶片材料是指:除去凤眼莲的心叶和最后一片衰老叶片后的其他叶片: 对旺盛生长期内凤眼莲的功能叶片的PEPC酶活性测定包括: a)称取0.2g待测凤眼莲的功能叶片材料放入预冷的研钵,加入pH7.8的粗酶提取缓冲液:50mM/L Tris‑HCl,5mM/L二硫苏糖醇,1mM/L氯化镁,2%聚乙烯吡咯烷酮,研磨,经4层纱布过滤,过滤的研磨液收集离心管,在4℃,12000rpm下,离心20min,取上清液,即为粗酶液; b)叶绿素含量测定:粗酶液取40μl加到960μl无水乙醇中,分别在649nm、663nm和665nm下测定光吸收值, 总叶绿素含量Chl=叶绿素a含量+叶绿素b含量; 叶绿素a=12.7×A665‑2.59×A649; 叶绿素b=22.9×A649‑4.67×A663; 式中:A665是指OD值在665nm测定的吸光值,A649是指OD值在649nm下测定的吸光值,A663是指OD值在663nm下测定的吸光值; c)NADH吸光度变化:反应体系中加入pH8.0的50mmol Hepes‑KHO,以及10mmol碳酸氢钠,5mmol氯化镁,0.2mmol NADH‑Na2,50μl粗酶液,1.5μ苹果酸脱氢酶,用蒸馏水定容到1ml,混匀后加入5mmolPEP,在紫外分光光度计上记录90s内每15s记录1次340nm的光密度的下降数值, d)PEPC酶的活性=ΔOD340×103/[6.3×Chl×(反应体系量/粗酶液体量)×反应时间]。 |
地址 |
210014 江苏省南京市玄武区钟灵街50号 |