一种同时检测猪链球菌2型胞外蛋白因子和溶血素基因的荧光定量PCR方法

摘要

本发明涉及一种基于SYBR Green染料溶解曲线分析法同时检测猪链球菌2型胞外蛋白因子EF和溶血素基因SLY的荧光定量PCR方法。根据GenBank公开的猪链球菌2型EF、SLY基因保守序列，设计、合成2对特异引物，优化PCR反应体系和反应条件，通过分析扩增曲线和溶解曲线，建立了同时检测猪链球菌2型EF、SLY基因的SYBR GreenI染料法荧光定量PCR方法。在此基础上，优化EF、SLY引物的摩尔比，调整2对引物的扩增效率，使溶解曲线中2个产物峰大小接近。利用建立的SYBR Green染料溶解曲线分析法能够方便的同时检测出猪链球菌2型EF、SLY基因。

主权项

一种同时检测猪链球菌2型胞外蛋白因子EF基因和溶血素SLY基因的荧光定量PCR引物，其特征在于荧光定量PCR扩增EF基因的上游引物为5′‑GAAGAAGAACCCAAGGAACC‑3′，下游引物为5′‑ACATTCTGACCACTCGCATC‑3′，荧光定量PCR扩增SLY  基因的上游引物为5′‑TTCCGATTTCGTATTCAACC‑3′，下游引物为5′‑AACTGTTCTCCACCACTCCC‑3′。