重组抗菌肽buforin IIb的生产方法

摘要

本发明公开了重组抗菌肽buforin IIb的生产方法，应用重组DNA技术，构建pSUMO/buforin IIb原核表达载体，再转化大肠杆菌，构建表达工程菌；工程菌以乳糖为诱导剂诱导表达SUMO-buforin IIb融合蛋白；然后经细胞破碎后释放出融合蛋白，使用镍离子亲和层析纯化，纯化后的融合蛋白经SUMO酶切反应，释放出buforin IIb，经镍离子亲和层析分离得到含有His6标签的SUMO蛋白和不含His6的buforin IIb蛋白。本发明方法在原核宿主细胞中高效表达了重组抗菌肽buforin IIb，分离纯化简单，重组蛋白纯度高，易操作，易放大，表达产物稳定性好，适于大规模工业化生产。

主权项

重组抗菌肽buforin IIb的生产方法，其特征在于，它包括如下步骤：(1)应用重组DNA技术，将buforin IIb基因插入pSUMO载体中，构建pSUMO/buforin IIb原核表达载体；(2)pSUMO/buforin IIb原核表达载体转化大肠杆菌，构建表达工程菌；(3)将步骤(2)得到的工程菌以乳糖为诱导剂诱导表达SUMO‑buforin IIb融合蛋白；(4)收集步骤(3)诱导表达后的菌体，经细胞破碎后释放出SUMO‑buforin IIb融合蛋白，使用镍离子亲和层析纯化，得到纯化后的SUMO‑buforin IIb融合蛋白；(5)将纯化后的SUMO‑buforin IIb融合蛋白经酶切反应，释放出buforin IIb，经镍离子亲和层析分离得到含有His6标签的SUMO蛋白和不含His6的buforin IIb蛋白。