Un método para la evolución molecular in vitro de la función proteínica

摘要

Un método para la generación de una secuencia o población de secuencias de polinucleótidos a partir de secuencias de polinucleótidos madre, el método comprendiendo los pasos de (a) proporcionar una primera población de moléculas de polinucleótidos y una segunda población de moléculas de polinucleótidos, la primera y segunda población juntas constituyendo cadenas positivas y negativas de una molécula de polinucleótidos madre; (b) digerir la primera y la segunda población de moléculas de polinucleótidos con una nucleasa para generar fragmentos de polinucleótidos; (c) contactar dichos fragmentos de polinucleótidos generados de las cadenas positivas con fragmentos generados de las cadenas negativas (bajo condiciones que permiten la hibridación de fragmentos); y (d) amplificar los fragmentos que hibridan entre si para generar al menos una molécula de polinucleótidos que difiere en secuencia de la molécula de polinucleótidos madre en el que el grado de variabilidad de secuencia en una región seleccionada de la al menos una molécula de polinucleótidos producida en el paso (d) es controlado por la adición de uno o más oligonucleótidos de variabilidad predeterminada, cuyos oligonucleótidos hibridan a una secuencia que se encuentra entre, pero excluye, los nucleótidos terminales 3' y 5' de la molécula de polinucleótidos madre.