发明名称 |
赤藓糖醇生产菌的选育方法 |
摘要 |
一种赤藓糖醇生产菌的选育方法,属于微生物技术领域。该方法采用基因工程的手段对菌种进行改造以增加4-磷酸赤藓糖激酶和赤藓糖还原酶的基因数量,然后对培养基组成及配比进行优化,原料中添加氯化铜,优化培养条件、对原本赤藓糖醇产量极低的Yarrowialipolytica菌株进行选育,从而获得了Yarrowialipolytica赤藓糖醇高产菌株。其具体选育方法步骤包括:(1)基因工程改造、(2)培养基制备、(3)培养条件优化,获得高产赤藓糖醇生产菌菌种。本发明通过基因工程改造,避免了传统工艺的盲目性,同时减轻了后续大量的筛选检测工作,Yarrowialipolytica中4-磷酸赤藓糖激酶和赤藓糖还原酶的合成量大大增加,有利于赤藓糖醇的生产。大大提高了赤藓糖醇生产菌的选育效率、菌种活力及产量。 |
申请公布号 |
CN102911889A |
申请公布日期 |
2013.02.06 |
申请号 |
CN201210463413.4 |
申请日期 |
2012.11.17 |
申请人 |
山东福田药业有限公司 |
发明人 |
王星云;邱学良;李雨;王成福;秦海青;李毅 |
分类号 |
C12N1/19(2006.01)I;C12R1/645(2006.01)N |
主分类号 |
C12N1/19(2006.01)I |
代理机构 |
德州市天科专利商标事务所 37210 |
代理人 |
房成星 |
主权项 |
一种赤藓糖醇生产菌的选育方法,其特征是首先采用基因工程的手段对菌种进行改造,以增加4‑磷酸赤藓糖激酶和赤藓糖还原酶的基因数量,然后对培养基组成及配比进行优化,原料中添加氯化铜,优化培养条件、对原本赤藓糖醇产量极低的Yarrowia lipolytica菌株进行选育,从而获得了Yarrowia lipolytica赤藓糖醇高产菌株;其具体选育方法步骤如下:(1)基因工程改造:4‑磷酸赤藓糖激酶和赤藓糖还原酶是赤藓糖醇生产的关键因子;通过低温超声破碎、凝胶色谱分离技术及全波长分光光度计,分离得到这两种酶,分析获得了这两种酶的基因结构;然后用PCR扩增仪将获得的这两种酶的基因片段进行大量复制,PCR扩增的条件:90℃变性30 S、53℃退20 S,72℃延伸30 S;然后将得到的基因分别连接到pBR327质粒中;将质粒转化到Yarrowia lipolytica中,使其在细胞内大量拷贝;这样Yarrowia lipolytica中4‑磷酸赤藓糖激酶和赤藓糖还原酶的合成量大大增加,有利于赤藓糖醇的生产;将转化成功的Yarrowia lipolytica进一步富集培养,制成试管斜面在4℃冰箱中保存待用;(2)培养基制备:优化得到的培养基配比按重量计分别为:一水葡萄糖30%‑40%,柠檬酸铵1%‑2%,七水硫酸镁0.01%‑0.08%,氯化铜0.0003%‑0.0006%,110℃,灭菌20min;(3)培养条件优化:由于培养条件对于微生物的代谢有很大的影响,所以必须对Yarrowia lipolytica的培养条件从温度、通风两个方面进行了重复试验与优化;温度在28℃‑31℃时其他副产物最少;每分钟的通风量为料液体积的20%‑50%时,Yarrowia lipolytica细胞到达稳定期的时间比较短,最终获得的高产菌,最终获得的高产菌,并利于赤藓糖醇的生产。 |
地址 |
251200 山东省德州市禹城市南环路666号 |