一种无荚膜型金黄色葡萄球菌胞外多糖-蛋白质偶联物的制备方法

摘要

本发明涉及一种无荚膜型金黄色葡萄球菌胞外多糖-蛋白质偶联物及其制备方法。所述的多糖-蛋白质偶联物由无荚膜型金黄色葡萄球菌的胞外多糖在偶联试剂作用下与蛋白质共价偶联制备而成的一种无荚膜型金黄色葡萄球菌胞外多糖-蛋白质偶联物。其制备方法采用改进的ADH间桥法或EDAC零距离交联法制备。无荚膜型金黄色葡萄球菌胞外多糖-蛋白质偶联物的制备将为预防金黄色葡萄球菌疫苗的研制提供了强有力的技术支撑。

主权项

一种无荚膜型金黄色葡萄球菌胞外多糖‑蛋白质偶联物的制备方法，其特征在于：该制备方法包括以下步骤：（1）无荚膜型金黄色葡萄球菌胞外多糖的纯化；（2）用pH值为4.7的100mmol/L MES缓冲液将纯化后的多糖配成10mg/mL的溶液，取1.0mL液体与400μL EDAC，浓度10mg/mL和88μL Sulfo‑NHS，浓度6.25mg/mL溶液混合反应4～6小时后，将反应物在pH值为7.5的1mmol/L EDTA的0.1mol/L PBS缓冲液中，4℃条件下透析18小时，收集衍生化的多糖中间体溶液；（3）向衍生化的多糖中间体溶液中加入蛋白质10mg，同时再加入200μL EDAC，浓度10mg/mL和44μL Sulfo‑NHS，浓度6.25mg/mL溶液进行反应12小时，形成多糖‑蛋白质偶联物溶液；（4）通过凝胶过滤层析法对多糖‑蛋白质偶联物进行纯化并收集波峰部分溶液。