发明名称 |
一种检测外周血有核细胞胞内蛋白质的方法 |
摘要 |
本发明涉及外周血有核细胞胞内蛋白质的检测方法,该方法先利用固定液将有核细胞固定,再利用破膜剂对有核细胞破膜的同时裂解红细胞,简化实验步骤,提高红细胞裂解效果。 |
申请公布号 |
CN102914657A |
申请公布日期 |
2013.02.06 |
申请号 |
CN201210379985.4 |
申请日期 |
2012.10.10 |
申请人 |
中国人民解放军军事医学科学院放射与辐射医学研究所 |
发明人 |
王治东;陈英;张学清 |
分类号 |
G01N33/68(2006.01)I;G01N33/554(2006.01)I |
主分类号 |
G01N33/68(2006.01)I |
代理机构 |
|
代理人 |
|
主权项 |
一种检测外周血有核细胞胞内蛋白质的方法,其特征在于包括如下步骤:1)在外周血样品中加入5倍体积固定液,室温作用30分钟;2)室温离心(500g)5分钟,去上清;3)加入洗液对细胞沉淀进行洗涤,室温条件下离心(500g)5分钟,去除上清,保留沉淀;4)加入5倍外周血样品体积的破膜剂,混匀细胞沉淀,室温作用15min;5)室温离心(500g)5分钟,去上清;6)加入洗液洗涤细胞,室温离心(500g)5分钟,去除上清,保留细胞沉淀;7)重复步骤6);8)在细胞沉淀中加入目标蛋白质特异性抗体,混匀后37℃条件下作用30min;9)加入洗液洗涤细胞,保留细胞沉淀,去除未结合的特异性抗体;10)重复步骤9);11)加入荧光标记第二抗体,混匀后37℃避光作用30分钟;12)加入洗液洗涤细胞,去除上清;13)重复步骤12);14)将细胞沉淀重悬于检测缓冲液中,4℃保存直至利用流式细胞仪或其他方法检测分析;15)对于检测的样品,均需设定未加入目标蛋白质特异性抗体的对照样品;16)数据分析,与对照样品相比,荧光细胞数目和/或荧光强度增加为阳性结果,荧光细胞数目和/或荧光强度没有改变为阴性结果。 |
地址 |
100850 北京市海淀区太平路27号院 |