一种红花檵木叶片总RNA的提取方法

摘要

本发明公开了一种红花檵木叶片总RNA的提取方法。采用本发明的提取方法提取的红花檵木RNA纯度高，杂质少，以α-tubulin、β-actin、18S rRNA、GAPDH等几个常用的内参基因特异引物序列进行RT-PCR检测，能够得到比较亮的与引物设计的预期片段大小一致的特异条带（见图2）,即本试验所用的方法得到总RNA完整性好，能用于后续的RT-PCR扩增，进行相关基因的表达分析。

主权项

一种红花檵木叶片总RNA的提取方法，包括如下步骤：（1）准备新鲜红花檵木叶片；（2）称取50～100mg步骤（1）所述的叶片，放入1.5ml离心管，用液氮浸泡离心管内叶片8～10s后，将叶片快速研磨成粉状；（3）向装有粉状叶片的离心管中加入0.3～0.5ml植物总RNA提取剂，静置3～5min，离心，上清转至无RNase离心管；（4）向装有上清的无RNase离心管中加入NaCl，混匀，再加入氯仿，混匀，离心；（5）取离心后的上层水相，转移至另一无RNase离心管，加入异丙醇，混匀，静置8～10min，离心；（6）弃掉离心后的上清，加入乙醇，离心；（7）倒出离心后的液体，再离心，得离心沉淀物，即为RNA，晾干2～3min，加入50μl DEPC水溶解RNA；（8）在步骤（7）所得的RNA溶液中加入buffer RDD、DNase储存液和RNase‑freeddH2O，于20℃～25℃孵育8～10min，再加入20mM的EDTA，60℃～65℃孵育8～10min，之后置于‑70℃保存备用；其中，所述的RNA溶液、buffer RDD、DNase储存液、RNase‑free ddH2O和20mM的EDTA五者的体积比为19～21:3～5:1:14～16:3～5。