一种鉴定双歧杆菌的方法

摘要

本发明涉及一种鉴定双歧杆菌的方法，具体涉及一种新的鉴定双歧杆菌的分子生物学方法。该方法通过对双歧杆菌16SrDNA上两段目标基因片段及丙酮酸激酶编码基因上一段目标基因片段的PCR扩增和测序分析，可以将双歧杆菌菌株鉴定到种的水平。本发明将为双歧杆菌鉴定提供一种更加准确、更易于操作的实用方法，有利于双歧杆菌菌株的分类及研究工作。

主权项

一种鉴定双歧杆菌的方法，其特征在于，采用PCR扩增和序列比对分析方法，将双歧杆菌菌株鉴定到种或亚种的水平；所述方法包括如下步骤：(1)设计合适的PCR引物对；(2)使用所述PCR引物对扩增待测双歧杆菌的DNA溶液，得到所述待测双歧杆菌的扩增产物；(3)对所述扩增产物进行测序分析，综合序列分析结果，在美国国立生物技术信息中心的双歧杆菌序列数据库中寻找序列同源性最高的菌株，由此鉴定双歧杆菌至种及亚种水平；所述PCR引物对是Bif500引物对、Bif900引物对和Pk300引物对；所述Bif500引物对是序列为5’‑CAT CCG GCA TTA CCA CCC‑3’的Bif500F和序列为5’‑CCA CCG TTA CAC CGG GAA‑3’的Bif500R；所述Bif900引物对是序列为5’‑ATA ATG CGG CCG CAC GGG CGG TGT GTR C‑3’的Bif900F和序列为5’‑TAA TAG CGG CCG CAG CMG CCG CGG TAA TWC‑3’的Bif900R；所述Pk300引物对是序列为5’‑TAA TCG ATG ATG GCA AGG TCC G‑3’的Pk300F和序列为5’‑TAA TAC GCG GGC TAC CAT GAT GCC‑3’的Pk300R。