一种鸡防御素9基因表达载体及其制备方法和应用

摘要

本发明公开了一种鸡防御素9基因表达载体及其制备方法和在防治种鸡输卵管疾病中的应用，属于基因工程技术领域。所述表达载体是以真核载体pVAX1为出发载体，用鸡卵清蛋白编码序列取代pVAX1上的CMV启动子，在其下游插入鸡防御素9基因构建而成。该表达载体的制备方法是将鸡防御素9基因连接到载体pVAX1上，鸡卵清蛋白基因连接到载体pMD18-T上，连接后的载体同时进行双酶切后重组，构建含有鸡卵清蛋白基因和鸡防御素9基因的pVAX1重组载体，即为鸡防御素9基因表达载体。本发明的表达载体可用于制备治疗种鸡输卵管疾病药物，治疗效果显著，安全无毒，具有广泛的应用前景。

主权项

一种鸡防御素9基因表达载体，其特征在于是以真核表达载体pVAX1为出发载体，用鸡卵清蛋白编码序列取代载体pVAX1上的CMV启动子，在其下游插入鸡防御素9基因的cDNA序列，构建成重组真核表达载体；所述鸡防御素9基因表达载体的制备方法，步骤如下：（1）扩增鸡防御素9基因；（2）将步骤（1）中鸡防御素9基因连接到载体pVAX1上；（3）扩增鸡卵清蛋白基因；（4）将步骤（3）所得鸡卵清蛋白基因连接到载体pMD18‑T上；（5）将步骤（2）所得产物与步骤（4）所得产物经酶切后重组，构建含有鸡防御素9基因、鸡卵清蛋白基因的pVAX1重组载体，即为鸡防御素9基因表达载体；其中，步骤（1）所述扩增鸡防御素9基因所用引物序列如SEQ ID NO:1~5所示；步骤（3）所述扩增鸡卵清蛋白基因所用引物序列如SEQ ID NO:6~7所示。