一种利用蜕皮检测大鲵群虹彩病毒带毒情况的试剂盒

摘要

本发明公开了一种利用蜕皮检测大鲵群虹彩病毒带毒情况的试剂盒和检测的方法。试剂盒包括A液，蜕皮样本裂解液，1管，含有PBS；1％triton-100；B液，1管，200ug/ml蛋白酶K；C液，1管，模板抽提液，1管，含有酚/氯仿/异戊醇，比例为25∶24∶1；D液，1管，3mol/l乙酸钠等；本发明利用大鲵的新鲜蜕皮作为检测病料样品，解决了必须杀死大鲵个体才能获取检测样品的不足；根据大鲵蜕皮的特点我们优化了从蜕皮中提取病毒基因组DNA的方法，设计了简单而有效地提取大鲵蜕皮样品中的虹彩病毒基因的试剂盒，以及针对虹彩病毒2个保守基因的2对PCR引物和聚合酶链式反应条件；设立了阳性和阴性对照品。利用本发明的试剂盒并进行标准步骤的检测，更加可靠地掌握大鲵群虹彩病毒带毒情况，有利于在实际生产中应用。

主权项

一种利用蜕皮检测大鲵群虹彩病毒带毒情况的试剂盒，其特征在于，包括DNA提取试剂组合和PCR扩增试剂组合，所述DNA提取试剂组合包括：A液，蜕皮样本裂解液，1管，含有PBS；1％Triton X‑100；B液，1管，200μg/mL蛋白酶K；C液，1管，模板抽提液，含有酚/氯仿/异戊醇，比例为25∶24∶1；D液，1管，3mol/L乙酸钠；E液，1管，含有无水乙醇；F液，1管，含有75％的乙醇；G液，1管，含有灭菌超纯水；所述PCR扩增试剂组合包括：H液，S1管，含有PCR扩增反应液，包括去离子水，dNTP底物，含Mg2+的1×缓冲液；Taq酶；引物S15’‑CCCCTCCCATTCTTCTTCTCC‑3’和5’‑GGCGTTGGTCAGTCTACCGTAAT‑3’；S2管，含有PCR扩增反应液，包括去离子水，dNTP底物，含Mg2+的1×缓冲液；Taq酶；引物S25’‑GGGCTAATGTATTGAAGACGC‑3’和5’‑TTGTAAACTTGGAGTGGAGGG‑3；I液，1管，阳性对照样品；J液，1管，阴性对照品；K液，1管，DNA markerII。