一种分子信标链置换等温扩增基因芯片检测技术及试剂盒

摘要

本发明公开了一种分子信标链置换等温扩增基因芯片检测技术及试剂盒。本发明综合链置换等温扩增技术及分子信标技术的优点，使DNA在等温条件下进行扩增，且随着DNA的扩增，分子信标的荧光信号不断被释放，被释放的目标DNA又结合到新的分子信标上，从而进行下一轮的扩增及荧光信号释放。依靠DNA聚合酶的链置换反应达到扩增放大信号的目的，通过分子信标的开环和闭环达到信号检测的目的。本发明使DNA/RNA扩增与信号检测合为一体，且不需要额外标记、杂交及洗涤过程，既简化了操作步骤，提高效率，且实现了芯片的实时检测，使结果更加准确可靠。

主权项

一种采用分子信标链置换等温扩增基因芯片检测目标DNA/RNA的方法，包括如下步骤：（1）分子信标的设计：分子信标包括环状区、5’茎杆区和3’茎杆区；其中，环状区能与目标DNA/RNA特异结合，5’茎杆区的序列比3’茎杆区长出8～25个碱基，标记为5’茎杆区延长段，5’茎杆区连接环状区部分的序列与3’茎杆区序列互补，使得形成发夹结构；分子信标3’端修饰有荧光分子； （2）芯片点样与链置换等温扩增反应：将分子信标5’端固定到固相支持物表面，形成分子信标微阵列芯片，然后将淬灭探针及样品DNA/RNA与芯片进行杂交，洗涤，然后将链置换等温扩增反应液、引物加到微阵列芯片上，等温扩增目的基因；或者是：将分子信标与淬灭探针混合，点样固定到固相支持物表面，形成分子信标微阵列芯片，然后将链置换等温扩增反应液、引物及样品DNA/RNA加到微阵列芯片上，等温扩增目的基因；所述淬灭探针为5’端修饰有荧光淬灭基团的寡核苷酸序列，至少有8个碱基与5’茎杆区延长段互补；所述引物与3’茎杆区互补；（3）对扩增结果进行荧光数值分析，根据荧光值，确定样品DNA是否为目标DNA及其含量。