表达多外源基因的昆虫生物反应器及其构建方法和应用

摘要

本发明公开了表达多外源基因的昆虫生物反应器及其构建方法和应用。其构建方法包括：（1）、将多拷贝高效细菌DNA复制起始子导入到杆状病毒基因组的几丁质酶和半胱氨酸蛋白酶两个基因中，得到杆状病毒穿梭质粒；（2）、用抗生素基因替换杆状病毒穿梭质粒的多角体基因下游的病毒复制的必须基因，获得杆状病毒质粒DNA；（3）、用反向选择标志基因替换杆状病毒穿梭质粒中的其它病毒复制和感染的非必须基因，即得。将外源目的基因替换所构建的昆虫生物反应器中的抗生素基因或反向选择标志基因，可在宿主昆虫或昆虫细胞中表达多种外源基因。本发明昆虫生物反应器可以在昆虫体内同时高效表达一个或多个外源基因，可大量、廉价生产重组蛋白。

主权项

一种能够同时表达多种外源目的基因的昆虫生物反应器的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：（1）、将多拷贝高效细菌DNA复制起始子导入到杆状病毒基因组的几丁质酶和半胱氨酸蛋白酶两个基因中，破坏杆状病毒几丁质酶和组织蛋白酶基因，构建得到杆状病毒穿梭质粒；所述的杆状病毒选自BmNPV、AcMNPV、ApNPV、BsSNPV、CfMNPV、EoSNPV、HaNPV、HzNPV、LdMNPV、MbMNPV、OpMNPV、SlMNPV、SeMNPV或TeNPV；（2）、用抗生素抗性基因替换杆状病毒穿梭质粒的多角体基因下游的病毒复制和感染的必需基因ORF1629基因，获得杆状病毒质粒DNA；（3）、用反向选择标志基因一次替换一个步骤（2）的杆状病毒穿梭质粒中的病毒复制和感染的非必须基因，即得。