挖掘真核生物基因转录调控组差异蛋白的方法

摘要

本发明提供了一种挖掘真核生物基因转录调控组差异蛋白的方法，首先将5’或3’端带有生物素的启动子序列或其片段与表面吸附有链亲和素的磁珠结合，形成磁珠-启动子二元复合物，然后从组织或细胞中提取特定时期的核蛋白，与磁珠-启动子二元复合物结合形成磁珠-启动子-核蛋白三元复合物，对该三元复合物进行SDS-PAGE分析，找出差异条带，以确定所要候选目的蛋白的片段长度，然后进行二维电泳分离提纯目的蛋白，并对纯化的目的蛋白进行质谱分析，从而确定所含蛋白。为从转录水平上研究基因表达的调节，寻找新蛋白并了解其对转录调节的作用提供了新思路，并为进一步阐明某些疾病的发病机制及基因治疗奠定了基础。

主权项

挖掘真核生物基因转录调控组差异蛋白的方法，其特征在于，包括以下步骤：1）将5’或3’端带有生物素的启动子序列或其片段与表面吸附有链亲和素的磁珠结合，形成磁珠‑启动子二元复合物；2）分别从处于不同生长、发育或分化阶段的细胞或组织中提取核蛋白，然后分别将这些特定时期的核蛋白与磁珠‑启动子二元复合物结合，从而形成磁珠‑启动子‑核蛋白三元复合物；3）对步骤2）中得到的三元复合物进行聚丙烯酰胺凝胶电泳分析，找出差异条带，以确定所要候选目的蛋白的片段长度，然后进行二维电泳分离提纯目的蛋白，并对分离纯化的目的蛋白进行质谱分析或氨基酸测序，从而确定所含蛋白。