调节核酸的甲基化/去甲基化状态的方法和试剂

摘要

本发明涉及调节核酸的甲基化/去甲基化状态的方法和试剂。本发明人首次证实，基因组DNA中的5-甲基胞嘧啶(5mC)和5-羟甲基胞嘧啶(5hmC)都可以被Tet双加氧酶氧化为5-羧基胞嘧啶(5caC)。胸腺嘧啶DNA糖基化酶(TDG)可以特异性地识别该5caC，并将其从基因组中切除，引起DNA主动去甲基化。因此，可基于此来调节基因组中DNA的甲基化/去甲基化作用，以及制备调节基因组中DNA的甲基化/去甲基化作用的试剂。本发明确证了细胞中基因组DNA存在5caC修饰，5caC修饰谱式可用来监测细胞状态，并发现ATP及其类似物可以作为Tet酶的调节剂。并且，白血病中Tet突变使5caC活性降低或丧失。

主权项

一种DNA去甲基化的方法，包括：(1)以Tet双加氧酶处理DNA，将DNA中5‑甲基胞嘧啶或5‑羟甲基胞嘧啶转变为5‑羧基胞嘧啶；(2)以胸腺嘧啶DNA糖基化酶处理步骤(1)获得的DNA，将DNA中5‑羧基胞嘧啶切除。(3)通过DNA剪切修复途径，在5‑羧基胞嘧啶切除位点加上非甲基化的胞嘧啶。