一种用于分离纯化高酶活人类DNA聚合酶δ的免疫亲和层析柱及分离纯化方法

摘要

本发明提供一种免疫亲和层析柱，以及应用该层析柱分离纯化高酶活人类DNA聚合酶δ的方法。所说的免疫亲和层析柱是将抗p125的多克隆抗体与CarboLinkTMCouplingGel耦联而制得。其分离纯化方法是：应用杆状病毒Bac-to-Bac系统，从感染了含各亚基重组病毒的宿主昆虫细胞Sf-9中，应用所制备的免疫亲和层析柱，结合离子交换层析，分离纯化出高纯度的目的产物。本发明可以简单、快速、高效地从杆状病毒表达系统中分离纯化出具高生物活性的重组人DNA聚合酶δ多亚基蛋白复合物；将极大地推动某些重要疾病、特别是癌症疾病研究所涉及到的DNA聚合酶分离纯化研究领域的发展。

主权项

一种高酶活人类DNA聚合酶δ的分离纯化方法，其特征在于：利用Bac‑to‑Bac系统，以pFastBac为供体质粒，分别插入源自人类DNA聚合酶基因POLD1、POLD3、POLD2和POLD4；再转染杆状病毒是AcMNPV；分别制备得到含人类聚合酶Pol δ四种亚基p125、p68、p50和p12的重组杆状病毒rAc ‑pFast‑p125、 rAc‑pFast‑p68、 rAc‑pFast‑p50 和rAc‑pFast‑p12，然后分别共感染宿主细胞Sf‑9，使得各亚基在细胞中表达和装配；收集感染的Sf‑9细胞，经超声波裂解、高速离心后，收集上清，经过免疫亲和层析柱和离子交换层析柱分离纯化出高纯度的目的产物；所述的免疫亲和层析柱是将抗p125的多克隆抗体与CarboLinkTM Coupling Gel耦联而制得。