一种流感病毒血凝素大规模分离纯化方法

摘要

一种流感病毒血凝素大规模分离纯化方法，包括：制备糖链磁性微粒复合物；将初步纯化后的裂解的经鸡胚增殖的流感病毒或细胞培养的流感病毒液与糖链磁性微粒复合物进行混合；对特异吸附血凝素的糖链磁性微粒复合物进行清洗，除去病毒液中的杂质；将与糖链磁性微粒复合物结合的流感病毒血凝素进行洗脱；对洗脱的流感病毒血凝素进行鉴定；糖链磁性微粒复合物的再生，重复使用。本发明能从灭活裂解经鸡胚增殖的流感病毒或细胞培养的流感病毒液中大规模分离纯化流感病毒血凝素，为大规模制造流感血凝素疫苗提供了条件。

主权项

一种流感病毒血凝素大规模分离纯化方法，其特征在于，该方法包括以下步骤：第一步：制备糖链磁性微粒复合物；第二步：将初步纯化后的裂解的经鸡胚增殖的流感病毒液或细胞培养的流感病毒液与糖链磁性微粒复合物进行混合；第三步：对特异吸附血凝素的糖链磁性微粒复合物进行清洗，除去病毒液中的杂质；第四步：将与糖链磁性微粒复合物结合的流感病毒血凝素进行洗脱；第五步：对洗脱的流感病毒血凝素进行鉴定；第六步：糖链磁性微粒复合物的再生，重复使用；所述制备糖链磁性微粒复合物包括以下步骤：1)取2支离心管，分别放入羟基化磁性微粒1‑15g；2)对羟基化磁性微粒进行磁性分离；3)对分离后的羟基化磁性微粒弃上清，并加入无水乙醇进行清洗；4)对无水乙醇清洗后的羟基化磁性微粒再次弃上清，再加入偶联缓冲液进行清洗；5)在装有偶联缓冲液清洗过的羟基化磁性微粒的2支离心管中每管加入90mL偶联缓冲液，并在其中一管加入15mmol/L含SAα2‑3Gal的糖链10‑100mL；另一管加入15mmol/L含SAα2‑6Gal的糖链10‑100mL；6)对2支离心管内的羟基化磁性微粒、偶联缓冲液、糖链进行混匀；并进行2‑10小时的振荡反应；糖链共价偶联到磁性微粒上，形成糖链磁性微粒复合物；7)对糖链磁性微粒复合物进行磁性分离；8)对磁性分离后的糖链磁性微粒复合物弃上清；并用结合缓冲液清洗3次；9)对结合缓冲液清洗后的糖链磁性微粒复合物置于保存缓冲液中保存。