一种柠檬明串珠菌发酵生产交替糖蔗糖酶的方法及应用

摘要

一种柠檬明串珠菌发酵生产交替糖蔗糖酶的方法及应用，属于食品生物技术领域。本发明利用一株交替糖蔗糖酶产生菌柠檬明串珠菌(Leuconostoccitreum)SK24.002进行斜面、种子、发酵三级培养，从发酵液与菌体细胞分离纯化得到一种交替糖蔗糖酶酶粉。本发明提供的利用柠檬明串珠菌SK24.002生产交替糖蔗糖酶的方法，其发酵时间短、费用低，安全性能可靠，可以进行液体深层发酵以及高密度细胞培养，适合于大规模生产。本发明所产交替糖蔗糖酶酶活达到10U/mg以上。其发酵产品无毒，可以直接用于生产许多有益生元功效的新型功能性碳水化合物。

主权项

一种用柠檬明串珠菌（Leuconostoc citreum）SK24.002，保藏号CCTCC NO：M 2011398，发酵生产交替糖蔗糖酶的方法，其特征在于：（1）以CCTCC NO：M 2011398为出发菌株，进行斜面、种子、发酵三级培养；斜面培养基以g/L计：葡萄糖1~5，酵母粉5~10，无水氯化钙0.02~0.025，磷酸氢二钾10~15，七水合硫酸镁0.2~0.5，一水合硫酸锰0.01~0.015，Vc 0.03~0.05，琼脂20，pH6.8~7.0，121℃灭菌20min；培养条件：培养温度30~37℃，培养时间10~18h；种子培养基以g/L计：葡萄糖5~10，酵母粉10~20，无水氯化钙0.02~0.025，磷酸氢二钾10~15，七水合硫酸镁0.2~0.5，一水合硫酸锰0.01~0.015，Vc 0.03~0.05，pH6.8~7.0，121℃灭菌20min；培养条件：100mL三角瓶装液40mL，将斜面培养后的斜面培养基按体积百分比5%~10%接入种子培养基中，培养温度30~37℃，摇瓶转速160rpm，培养时间8~12h；发酵培养基以g/L计：蔗糖20~40，酵母粉10~20，无水氯化钙0.02~0.025，磷酸氢二钾10~15，七水合硫酸镁0.2~0.5，吐温80 5~10mL/L，Vc 0.03~0.05，pH6.8~7.0，121℃灭菌20min；培养条件：将种子培养后的种子培养基按体积百分比5%~10%接入发酵培养基中，培养温度30~37℃，摇瓶转速160rpm，培养时间12~24h；（2）从发酵液中分离纯化得到交替糖蔗糖酶酶粉；将步骤（1）制得的发酵液经离心或板框过滤分离发酵上清液与微生物菌体，其中发酵上清液用分子截留量为30KDa的超滤膜经超滤去盐和杂蛋白，透过液再用50%的聚乙二醇沉淀，离心得到沉淀1；微生物菌体悬浮于8M、pH5.4的脲‑醋酸钠缓冲液中，25℃下振摇1~4h，离心得到上清液，透析处理后再用50%的聚乙二醇沉淀，离心得到沉淀2，最后将上述两步骤所得沉淀合并冷冻干燥得到交替糖蔗糖酶酶粉。