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<p>Un método de genotipificación en un locus de HLA utilizando un sistema de PCR múltiple que tiene una mezclamaestra de PCR uniforme y aplicando un perfil de termociclación uniforme, cuyo método consiste en las siguientesetapas:i) establecer una pluralidad de al menos 25 recipientes de reacción PCR con una solución acuosa cadauno que contiene un par de cebadores de PCR para amplificar una región control de ADN, un par decebadores de PCR específicos de alelos de HLA diferentes para amplificar diferentes alelos de HLA en ellocus y una mezcla maestra de PCR uniforme que tiene un colorante fluorescente capaz de detectar ADNde doble hebra;ii) añadir una muestra biológica que contiene ADN codificante de HLA y ADN codificante control;iii) amplificar el ADN codificante de HLA y el ADN codificante control en los recipientes de reacciónutilizando un perfil de termociclación uniforme en la pluralidad de recipientes de reacción para obtenersoluciones que contienen ADN amplificado que tiene un amplicón control y amplicones de HLA, donde latemperatura de fusión del amplicón control es al menos 10°C inferior a la temperatura de fusión de losamplicones de HLA; yiv) determinar el tipo de HLA por el perfil de fusión del ADN en las soluciones.</p> |
