牦牛乳酪蛋白抑菌肽的制备方法

摘要

本发明涉及乳酪蛋白抑菌肽的制备方法，属于生物技术领域。一种牦牛乳酪蛋白抑菌肽的制备方法，其制备步骤为：（1）牦牛乳酪蛋白溶解；（2）加胰蛋白酶水解；（3）灭活胰蛋白酶；（4）沉淀酪蛋白；（5）离心除沉淀；(6)葡聚糖凝胶层析分离；（7）质谱测定分子量；（8）超滤。用截留量1000Da和2500Da的超滤膜，收集1000Da至2500Da分子量范围的肽片段。（9）喷雾干燥。该方法制备的抑菌肽，肽分子量分布集中，抑菌活性强，金黄色葡萄球杆菌最小抑制浓度270μg/mL，大肠埃希氏菌最小抑菌浓度980μg/mL。

主权项

一种牦牛乳酪蛋白抑菌肽的制备方法，其特征是包括以下步骤：（1）牦牛乳酪蛋白溶解：配置2%‑10%的牦牛乳酪蛋白水溶液，调节温度30℃‑65℃，pH6.5‑9.0，搅拌，使牦牛乳酪蛋白溶解；（2）加胰蛋白酶水解：称取按步骤（1）2%‑10%的牦牛乳酪蛋的量加入0.5%‑2%的胰蛋白酶，维持反应温度30℃‑65℃，pH6.5‑9.0，反应1~4小时；（3）灭活胰蛋白酶，升温至80℃‑100℃，维持15‑30分钟：（4）沉淀酪蛋白：用盐酸调节pH到3.8‑4.6，使酪蛋白在其等电点处析出：（5）离心：4000g‑12000g离心力，离心除去酪蛋白沉淀，留上清液：（6）葡聚糖凝胶层析分离：采用SephadexG25凝胶柱对离心液进行分部收集，检测各收集液抑菌活性；（7）质谱测定分子量：采用质谱仪对抑菌组分层析液进行分子量测定，确定肽分子量，确定超滤膜分子量范围；（8）超滤：取离心后上清液，过截留量1000Da‑2500Da的超滤膜，收集分子量在1000Da‑2500Da之间的多肽；（9）喷雾干燥：取超滤液，采用喷雾干燥机，进行喷干，得到牦牛乳酪蛋白抑菌肽。