一种单条线虫DNA的快速提取方法

摘要

本发明公开了一种快速、高效、适用范围广的单条线虫DNA提取方法，使用PCRBuffer溶液代替WLB裂解液和SDS裂解液，减少了溶液配置的不确定性和外来离子的影响；通过冷热剧烈变化使线虫体壁细胞破裂；用蛋白酶K消化线虫细胞，释放DNA；整个提取过程在一个PCR管中完成，并可直接用于PCR扩增，没有溶液的转移和过多的溶质添加，减少污染及对后续PCR的影响；本发明使用变温处理代替其他手工破碎方法，不需要操作技巧，减少了外界污染物的掺入，使用液氮处理，缩短了处理时间；可以对单条线虫提取的DNA稀释32倍进行PCR扩增反应检测。

主权项

一种单条线虫DNA的快速提取方法，其特征在于包括下述步骤：a线虫洗涤：在灭菌的洁净载玻片上滴加灭菌的双蒸水，用灭菌的0号针将单条线虫挑入所述双蒸水中洗涤；b线虫转移：上述单条线虫洗涤后，再将线虫挑入灭菌的200 μL PCR管中，所述PCR管内含8 μL双蒸水和1 μL 10×PCR Buffer溶液，然后13000 rpm离心1 min，所述10×PCR Buffer溶液为无Mg2+的10×PCR Buffer溶液，其含有pH8.3的Tris‑HCl溶液 100 mM, KCl 溶液500 mM；c破坏线虫表皮细胞：离心后，将所述 PCR管置于液氮中速冷1 min，取出后立即在85℃条件下恒温2 min，再立即将PCR管的温度速降至56℃，恒温30 sec；d DNA释放：在上述56℃恒温后的PCR管中加入1 μL浓度为1 mg/mL的蛋白酶K，先在56℃下恒温15 min，再在95℃条件下恒温10 min，得到DNA提取液，‑20℃保存备用。