发明名称 |
发酵乳酸杆菌的PCR快速检测方法 |
摘要 |
一种快速检测发酵乳酸杆菌的PCR方法。首先提取待测样品分离琼脂平板上可疑菌落的基因组DNA并稀释备用;再利用发酵乳酸杆菌基因组保守性DNA序列设计特异性引物;然后使用该引物对待测样品分离琼脂平板上可疑菌落的基因组DNA进行PCR扩增,对PCR产物进行琼脂糖凝胶电泳检测。其加样参数为:每个PCR反应总体积为25μl,包括待测样品分离琼脂平板上可疑菌落的基因组DNA,2μl;10×PCRBuffer,2.5μl;Mg2+1.5mmol/L;Tag酶1u;dNTP 0.1mmol/L;权利要求1中的特异性引物各10pmol;最后加ddH2O至25μl;PCR反应程序为:95℃变性5min;95℃30s,62℃30s,72℃40s,该反应进行35个循环;72℃延伸5min,4℃保存。具有检测速度快、成本低的优点。 |
申请公布号 |
CN102041299B |
申请公布日期 |
2013.01.16 |
申请号 |
CN200910113475.0 |
申请日期 |
2009.10.09 |
申请人 |
中粮新疆屯河股份有限公司 |
发明人 |
刘云国;丁生林;徐榕蔓;宋佳 |
分类号 |
C12Q1/68(2006.01)I;C12R1/225(2006.01)I |
主分类号 |
C12Q1/68(2006.01)I |
代理机构 |
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代理人 |
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主权项 |
一种快速检测发酵乳酸杆菌的PCR方法,其特征在于首先提取待测样品分离琼脂平板上可疑菌落的基因组DNA并稀释备用;再利用发酵乳酸杆菌基因组保守性DNA序列设计特异性引物;然后使用该引物对待测样品分离琼脂平板上可疑菌落的基因组DNA进行PCR扩增,对PCR产物进行琼脂糖凝胶电泳检测,其中所述的发酵乳酸杆菌特异性引物为:L.fermen‑F:5’‑TGATGGTCCTATGCCACAAA‑3’;L.fermen‑R:5’‑TCAACACCGGTAACAGTGGA‑3’;用该引物时的退火温度为62℃。 |
地址 |
830000 新疆维吾尔自治区乌鲁木齐市黄河路2号招商银行大厦 |