SET基因RNA干扰重组载体及其构建方法和应用

摘要

本发明公开了一种SET基因RNA干扰重组载体及其构建方法和应用，所述SET基因RNA干扰重组载体包括表达载体的基本序列、抗性基因序列、多克隆位点、启动子序列、可表达的SET shRNA的寡核苷酸链模板序列，所述的可表达的SET shRNA的寡核苷酸链模板序列正向插入表达载体的多克隆位点序列内；所述可表达的SET shRNA的寡核苷酸链模板序列依据SET mRNA靶序列设计；所述表达载体为psiRNA-hH1 neo系列。本发明成功构建针对人SET基因的RNA干扰真核质粒载体，其能有效地抑制肝细胞内SET蛋白的表达，为深入研究SET蛋白在三氯乙烯致肝细胞毒性中的作用奠定了基础。

主权项

一种SET基因RNA干扰重组载体，其特征是：包括表达载体的基本序列、抗性基因序列、多克隆位点、启动子序列、可表达的SET shRNA 的寡核苷酸链模板序列，所述的可表达的SET shRNA 的寡核苷酸链模板序列正向插入表达载体的多克隆位点序列内；所述可表达的SET shRNA 的寡核苷酸链模板序列依据SET mRNA靶序列设计；所述表达载体为psiRNA‑hH1 neo；所述的多克隆位点包括BbsⅠ限制性酶切位点，所述寡核苷酸链包括Sense +Loop+Antisense，并在两端加上BbsⅠ限制性酶切位点；所述的Loop为TCAAGAG；所述的SET mRNA靶序列为5'‑AACAGCAAGAAGCGATTGAAC‑3'，即SQE ID No 1；所述的寡核苷酸链模板序列包括寡核苷酸正义链序列和寡核苷酸反义链序列，所述正义链序列为：5'‑TCCCAACAGCAAGAAGCGATTGAACTCAAGAGGTTCAATCGCTTC TTGCTGTTTT‑3'，即SQE ID No 3；所述反义链序列为：5'‑CAAAAAACAGCAAGAAGCGATTGAACACTCTTGATGTTCAATCGCTTCTTGCTGT ‑3'，即SQE ID No 4。