一种水环境中雌激素结合体的共检测方法

摘要

本发明涉及一种水环境中内分泌干扰物的检测技术，特别是涉及一种采用液相色谱-串联质谱联用技术对水体样品中雌激素结合体雌酮硫酸盐结合体(Estrone-3-sulfate，E1-3S)、17β-雌二醇硫酸盐结合体(Estradiol-3-sulfate，E2-3S)及雌酮葡萄糖苷酸结合体(Estrone-3-glucuronide，E1-3G)、17β-雌二醇葡萄糖苷酸结合体(Estradiol-3-glucuronide，E2-3G)的共检测方法。本方法将采集好的水体样品，采用HLB固相萃取小柱富集其中的E1-3S、E2-3S及E1-3G、E2-3G，再将活化好的NH2柱接于HLB柱下方，用甲醇淋洗，最后用2％氨水甲醇溶液洗脱，利用液相色谱-串联质谱联用分析。该方法环境友好、易于操作、且回收率较高，能够快速分析水体样品中痕量存在的雌激素结合体E1-3S、E2-3S及E1-3G、E2-3G。

主权项

1.一种水环境中雌激素结合体的共检测方法，其特征在于该方法包括如下步骤：（1）水环境样品前处理取4L水样采用GF/F玻璃纤维滤膜进行过滤，并用4mol/L的盐酸调节pH为3；利用固相萃取装置活化Waters公司的HLB固相萃取柱，活化的顺序为：5mL色谱纯乙酸乙酯、5mL色谱纯甲醇及10mL超纯水，流速为1mL/min；采用已活化的固相萃取柱对水样进行固相萃取富集，控制流速为3mL/min；萃取结束后真空抽干5min，待净化；将用5mL甲醇活化过的Waters公司的NH2柱用固相萃取柱转接头接于干燥的HLB柱下方，接着用6mL甲醇淋洗HLB柱和NH2柱串联装置，再用6mL 含2%氨水的甲醇溶液洗脱NH2柱上的雌激素结合体，洗脱液收集于10mL玻璃离心管中，控制流速为1mL/min，洗脱液在氮气流下缓慢吹干，加入1mL体积比为1:1的乙腈/水混合液，漩涡混合，冷藏等待浓度测定；（2）利用液相色谱-串联质谱分析雌激素结合体液相色谱-串联质谱联用仪器为：Agilent 1100 高效液相色谱系统，包括四元输液泵，美国Agilent公司的自动进样器，3200QTRAP型液相色谱/串联质谱仪，配有电喷雾离子化源（ESI）以及Analyst 1.4.1 数据处理软件； 色谱柱：Nova-Pak C18，3.9mm×150mm×4μm，Waters公司；离子源：电喷雾离子化源（ESI），负离子方式检测；离子喷射电压：-4500V；温度：450℃；源内气体GS1为氮气，压力：45psi；源内气体GS2为氮气，压力：45psi；气帘气体为氮气，压力：20psi；扫描方式为多重反应监测（MRM）；碰撞气为氮气，压力：Medium；雌酮硫酸盐结合体（Estrone-3-sulfate，E1-3S）、17β-雌二醇硫酸盐结合体（Estradiol-3-sulfate，E2-3S）及雌酮葡萄糖苷酸结合体（Estrone-3-glucuronide，E1-3G）、17β-雌二醇葡萄糖苷酸结合体（Estradiol-3-glucuronide，E2-3G）进行分离的HPLC流动相梯度洗脱条件如表1和表2所示：表1  测定E1-3S和E2-3S流动相梯度洗脱条件表2  测定E1-3G和E2-3G流动相梯度洗脱条件（3）标准曲线的绘制以外标法进行定量测定；（4）样品的测定采集待测水样，按步骤（1）对水环境样品进行预处理，再按步骤（2）进行液相色谱-串联质谱联用检测，并与步骤（3）得到的标准曲线比较，通过换算最终得到待测水体样品中雌激素的含量。