扩展青霉菌脂肪酶在制备生物柴油中的应用

摘要

本发明申请提供一种获得高效表达脂肪酶菌株的方法以及利用该方法得到高表达的脂肪酶在生产生物柴油中的应用，包括：原料的预处理：将生物油脂过滤去除杂质，进行搅拌得到乳化；酯交换反应步骤：将摩尔比为1∶1-3的油脂和甲醇或乙醇加入反应容器中，然后加入上述得到的改型扩展青霉菌脂肪酶和有机溶剂，在20-50℃的反应条件下，密闭混合反应6-24小时，在反应的过程中，再次加入甲醇或乙醇，每次加入甲醇或乙醇与油脂的摩尔比为1-3∶1；生物柴油的获得：反应结束后，将所述的脂肪酶从反应物中分离出来，再将反应产物进行离心分层，静置后分离处下层的粗甘油，上层液体进行蒸馏，回收有机溶剂，得到成品生物柴油。

主权项

一种获得高效表达脂肪酶菌株的方法，其特征在于：所述的方法包括如下的步骤：1)获得潮霉素抗性表达盒并克隆至目标质粒上，获得潮霉素抗性的重组质粒；2)分别扩增青霉的脂肪酶基因(PEL)、构巢曲霉的强启动子3‑磷酸甘油醛脱氢酶启动子(PgpdA)和构巢曲霉色氨酸合成酶终止子(TtrpC)，得到有强启动子驱动的PEL基因表达盒；3)将该PEL基因表达盒插入到潮霉素抗性的重组质粒中，获得了含潮霉素筛选标记的PEL基因超表达载体；4)将含潮霉素筛选标记的PEL基因超表达载体转化工程农杆菌，利用农杆菌介导转化法将PEL基因表达盒转化到青霉菌株中，获得高表达脂肪酶的青霉基因工程菌。