一种畜肉腐败菌原位荧光染色的快速检测方法

摘要

本发明涉及一种畜肉腐败菌原位荧光染色的快速检测方法。利用荧光染料对腐败菌活体进行原位荧光染色，结合激光共聚焦扫描显微镜断层扫描拍摄图像，并计算平均荧光强度代表猪肉组织该切片部位单位面积相对的细胞数量。本发明操作简单、检测速度快、无危害性，在不破坏生理状态的前提下，实现畜肉腐败菌的快速检测，能实时地观察和跟踪腐败菌在猪肉组织的分布、侵染情况及其动态变化。为进一步深入研究畜肉的腐败变质机理，以更有针对性地对腐败菌加以控制，延长肉品货架期，保障肉品品质安全，维护消费者健康有着直接的现实意义。

主权项

一种针对畜肉所含腐败菌原位荧光染色的快速检测方法，按照以下步骤进行：待测肉样切片：从待检畜肉中切取一小块肉样，用冷冻切片机在同一位置连续切成一定厚度的多个薄片置于干净载玻片上；荧光染料配制和染色：用丙酮配制浓度为0.5mg/mL的荧光染料溶液，并滴加到猪肉切片中，使溶液覆盖整个猪肉切片，在室温暗处染色15分钟后，再滴加甘油与PBS体积比为9：1的混合液并用盖玻片对猪肉切片进行封片；激光共聚焦扫描显微镜检测：将染色猪肉切片倒置于激光共聚焦扫描显微镜中，用激发光激发，并选取同样检测条件，调焦进行断层扫描拍摄保存图像，可观察到侵染有腐败菌的猪肉组织部位呈现黄绿色荧光；即达到实时观察和跟踪腐败菌在猪肉组织的分布、侵染情况及其动态变化。