一种从宣木瓜果实中提取木瓜蛋白酶和SOD粗酶的方法

摘要

本发明公开了一种从宣木瓜果实中提取木瓜蛋白酶和SOD复合酶的方法。从宣木瓜果实中提取木瓜蛋白酶的方法包括以下步骤：新鲜宣木瓜果实→清洗，去皮、去籽，研磨均匀→超声提取→冷冻离心→上清液粗过滤→超滤→冷冻干燥→木瓜蛋白酶。从宣木瓜果实中提取SOD酶的方法包括以下步骤：新鲜宣木瓜果实→清洗，去皮、去籽→加提取缓冲液，研磨均匀→冷冻离心→上清液→丙酮沉淀→超滤→冷冻干燥→SOD复合酶。本方法提取木瓜蛋白酶和SOD的过程中操作简单，加工成本较低，所得酶的纯度高，活力高。

主权项

一种从宣木瓜果实中提取SOD复合酶的方法，其特征在于它包括以下步骤：(1)将新鲜宣木瓜果实洗净，去皮、去籽；(2)向步骤(1)处理过的果实里加入提取缓冲液进行研磨匀浆；提取缓冲液的制备：称取77.00mgDTT，5.000gPVP，加入到100ml0.1mol/L，pH7.8的磷酸缓冲液中充分摇匀，pH7.8的磷酸缓冲液中含5mmol/LDTT和5％PVP，低温4℃贮藏备用；(3)将步骤(2)的研磨匀浆采用离心机冷冻离心分离，得到的上层清液为粗酶液，离心机的转速为12000‑20000r/min，温度为4‑12℃，分离时间为30‑50min；(4)将离心所得的粗酶液置于冰浴中，加入预冷的丙酮，搅拌15‑30min，于3‑4℃，4500‑10000r/min冷冻离心15‑20min，弃上清液，用缓冲液溶解沉淀，再透析缓冲液，收集透析液，于3‑4℃下静置一夜；所述的缓冲液在100ml0.1mol/L的PH 7.8的磷酸缓冲液中，添加77.00mg DTT，5.000gPVP，充分混匀所制得的溶液；(5)将静置一夜的透析液在3‑4℃下、5000‑20000r/min冷冻离心10‑12min，收集上清液，3‑4℃低温保存；(6)将步骤(5)收集的上层清液采用截留分子量为17000‑18000道尔顿的中空纤维膜进行浓缩；(7)将浓缩后的产物进行冷冻真空干燥，得SOD复合酶。