| 主权项 |
一种冠突散囊菌快速分离方法，其特征在于：其具体步骤为：1）成品茯砖茶的处理；2）冠突散囊菌发酵液的制备；3）冠突散囊菌快速分离培养基的制备；4）冠突散囊菌的培养、纯化；5）冠突散囊菌的保存；所述的成品茯砖茶的处理是用植物微型粉碎机将样品粉碎，200目过筛、65℃干燥2小时后称取1g样品，定容10mL，配成浓度为10‑1、10‑2、10‑3、10‑4、 10‑5各10mL，取10‑3、 10‑4、 10‑5三个梯度准备涂布改良PDA平板；所述的冠突散囊菌发酵液的制备方法为：接种实验室已经分离纯化的冠突散囊菌于PDA液体培养基中，28℃培养至OD值0.6‑0.8,用0.2μm过滤膜进行过滤灭菌，即为制备好的发酵液；所述的冠突散囊菌快速分离培养基的制备是：制备改良PDA平板，改良PDA固体培养基平板的制备方法是：将马铃薯洗净去皮，称取200g，切成小块放入烧杯中，加适量蒸馏水，煮沸1小时，稍冷后用双层纱布过滤，在滤液中加100ml制备好的茶汁，然后加入15g琼脂，加热熔化，最后加入蔗糖20g，混匀，用量筒定容至1000ml，趁热分装在三角瓶中，在1.1kg/cm2，121℃中保持20分钟灭菌，灭菌结束后冷却至50℃左右，按照培养基量和冠状散囊菌发酵液体积比10:1添加制备好的冠状散囊菌发酵液，趁热倒平板，即为冠状散囊菌快速分离培养基平板，所述茶汁的制备方法按照1g茯砖茶样本比30ml蒸馏水的比例称取20g茯砖茶，加入600ml蒸馏水，100℃水浴2小时，待稍冷却后用量筒定容至600ml即为制备好的茶汁。2、根据权利要求1所述的冠突散囊菌快速分离方法，其特征在于：所述的冠突散囊菌的培养、纯化为：取浓度10‑3、 10‑4、 10‑5三个梯度各0.5mL涂布于改良PDA平板超净台上吹干，28℃培养2‑3天，挑取金黄色优势菌落，画线接种至同样的改良PDA平板上，同样条件继续培养直至纯化；结果判定：当冠突散囊菌落呈现金黄色，菌落形态相同、大小一致，无其它杂菌生长即表示冠突散囊菌已经纯化分离。 |
