胰岛素与血清蛋白可逆性结合的亲和力指标测定方法及应用

摘要

本发明属生物技术领域，涉及胰岛素与血清蛋白结合指标的测定，具体涉及一种胰岛素与血清蛋白可逆性结合的亲和力指标测定方法及应用。本发明方法包括蛋白结合胰岛素、游离胰岛素、结合/游离胰岛素比值以及蛋白捕获胰岛素能力测定。经体外生化研究、培养细胞模型、病人血清指标检测、影响胰岛素与血清蛋白可逆性结合的亲和力的药物和血清成份、正常动物和糖尿病动物胰岛素与血清蛋白结合的亲和力改变对血糖的影响等试验验证，本发明方法获得的测定指标可进一步为糖尿病的预警、早期诊断、预后判断、药物筛选、指导预防和治疗提供实验数据和理论依据。

主权项

胰岛素与血清蛋白可逆性结合的亲和力指标测定方法，其特征在于，其包括步骤：1)检测胰岛素浓度采用胰岛素检测试剂盒测定血清和2％白蛋白中所含胰岛素水平；2)高压液相色谱分析分析白蛋白‑胰岛素结合HPLC检测胰岛素和白蛋白混合物中胰岛素含量，HPLC检测吐温处理的胰岛素和白蛋白混合物中胰岛素含量；3)分离制备检测游离胰岛素和结合胰岛素通过超滤离心柱分离溶液中的游离胰岛素和蛋白结合胰岛素；4)测定白蛋白捕获胰岛素能力采用一个固相系统检测胆固醇对白蛋白‑胰岛素结合的影响，包括白蛋白包被ELISA法检测不同血清层及白蛋白层的胰岛素含量；超滤法测定蛋白结合胰岛素、非蛋白结合的游离胰岛素及其比值的方法。