人乳头瘤病毒16型外壳蛋白病毒样颗粒及其制备方法和用途

摘要

本发明涉及人乳头瘤病毒16型病毒样颗粒，及其生产方法和用途，在生产中使用了对N端改造的主要衣壳蛋白基因和C末端融合改造的大肠杆菌热不稳定肠毒素LTK63的次要衣壳蛋白L2融合基因；在杆状病毒-昆虫细胞表达体系中生产L1NVLPs、L1N/L2VLPs和L1N/L2-LTK63嵌合病毒样颗粒(cVLPs)。源自HPV16L1N基因的病毒样颗粒产量高；本发明还涉及所述病毒样颗粒在制备疫苗中的应用，该疫苗免疫原性好，可预防HPV16感染及相关病变。

主权项

一种病毒样颗粒，其特征在于该病毒样颗粒由下列步骤获得：1)使用pFastBacDual‑HPV 16L 1N/L2或pFastBacDual‑HPV 16L 1N/L2‑LTK63 linkB重组质粒分别转化感受态大肠杆菌DH10Bac；2)筛选鉴定获得分别重组有HPV16L1N/L2基因或HPV16L1N/L2‑LTK63 linkB基因的重组Bacmid；3)将所述重组Bacmid转染对数生长期的昆虫细胞，转染后收集上清，获得含有HPV16L1N/L2基因或HPV16L1N/L2‑LTK63linkB基因的重组杆状病毒；4)用所述含有HPV16L1N/L2基因或HPV16L1N/L2‑LTK63 linkB基因的重组杆状病毒感染对数生长期的Sf9昆虫细胞，使重组杆状病毒在感染细胞内分别表达导入的HPV16L1N/L2基因或HPV16L1N/L2‑LTK63基因；5)裂解感染有含HPV16L1N/L2基因或HPV16L1N/L2‑LTK63 linkB基因的重组杆状病毒的细胞，纯化获得HPV16L1N/L2VLPs或HPV16L1N/L2‑LTK63嵌合病毒样颗粒，其中所述的pFastBacDual‑HPV16L1N/L2重组质粒于2006年9月7日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，其保藏号为CGMCC ID NO.1802，其中所述的pFastBacDual‑HPV16L1N/L2‑LTK63 linkB重组质粒于2006年9月7日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，其保藏号为CGMCC ID NO.1803。