重组的MVA及其产生方法

摘要

本发明涉及可用于产生重组的MVA病毒的MVA突变体，以及被这些突变的MVA病毒感染的宿主细胞。本发明进一步涉及DNA-载体构建体，以及利用这些突变的MVA病毒和DNA-载体构建体产生重组MVA的方法。

主权项

一种DNA‑载体构建体，包括编码牛痘病毒K1L基因和编码外源蛋白质的序列，其中牛痘病毒K1L和外源蛋白质的编码区在两侧连接有DNA序列，该DNA序列为在MVA基因组中侧面连接在MVA突变体基因组中设计的K1L缺失的位点的序列，其中在所述MVA突变体中，MVA基因组中的所有K1L基因序列和它的启动子序列已经通过缺失的方法而失活，以避免MVA中的K1L基因序列与所述DNA‑载体构建体上的K1L基因序列之间的同源重组；该载体包括以下功能连接的组件：‑K1L标记基因，包括牛痘病毒的K1L编码序列和转录单元，‑两个DNA序列，连接在K1L标记基因的两侧，以通过同源重组随后从重组的MVA上除去该标记，‑克隆位点，异源基因可以任意地插入该位点；‑用于牛痘病毒的特异性转录的启动子；所述组件侧面连接有两个MVA‑DNA序列，这些序列对于外源基因靶向插入到MVA基因组中设计的K1L缺失的位点是必需的。