主权项 |
一种构树简便组培方法,包括抑菌剂的配制、培养容器消毒、培养基配制、诱导培养、增殖培养、生根培养和瓶苗移栽,其特征在于: (1)抑菌剂的配制:抑菌剂1号的配制方法:在益培隆杀菌剂A瓶药剂中加入20 ml蒸馏水稀释后与B瓶药剂混合,并用蒸馏水定容到100 ml,为抑菌剂1号;抑菌剂2号的配制方法:在益培隆杀菌剂A瓶药剂中加入20 ml蒸馏水稀释后与B瓶药剂混合,再加入次氯酸钠溶液10~20 ml,并用蒸馏水定容至100 ml,为抑菌剂2号;所述次氯酸钠溶液为分析纯,活性氯的重量百分比不低于0.5%; (2)培养容器消毒:将培养瓶及瓶盖在抑菌剂1号与水的体积比为0.3 %~0.5 %的水溶液中浸泡不少于10 h,保存备用;(3)培养基配制:诱导培养基为MS+0.5~1.0 mg/L 6‑BA+0.1~0.5 mg/L NAA+3~5 ml/L抑菌剂2号+20 g/L蔗糖+3.5 g/L琼脂粉,pH5.8;增殖培养基为MS+1.0 mg/L 6‑BA+0.1~0.5 mg/L NAA+3~5 ml/L抑菌剂2号+20 g/L蔗糖+3.5 g/L琼脂粉,pH5.8;生根培养基为1/2MS+0.1~0.5 mg/L NAA+3~5 ml/L抑菌剂2号+20 g/L蔗糖+3.5 g/L琼脂粉,pH5.8;所述MS培养基为1962年,Murashige和Skoog公开的MS培养基;所述6‑BA,指6‑苄氨基嘌吟;所述NAA,指〆‑萘乙酸;配制培养基时,先不加抑菌剂2号,按各培养基配方配齐其他原料后,用蒸馏水定容、加热至琼脂粉完全溶解,然后按各培养基配方添加抑菌剂2号,用1 mol/L的NaOH或1 mol/L的HCl调pH值至5.8,分装到培养容器中,封口,冷却凝固,备用;(4)诱导培养:将采集的构树枝条用酒精消毒后,用0.1 %的升汞溶液消毒6 min,取出用无菌水冲洗后,接种于诱导培养基上;培养室温度为28 ℃,光照12 h,光照强度为1400 lx; (5)增殖培养:将诱导出的芽苗切成带腋芽的茎段接种到增殖培养基上,30 d转接一次;培养室温度为26 ℃,光照12 h,光照强度为1400 lx; (6)生根培养:当苗长到2~4 cm时,将丛生苗切成单株,接种到生根培养基上,25 d移栽;培养室温度为25 ℃,光照12 h,光照强度为1500 lx;瓶苗移栽:生根培养25 d后,将生根苗取出,洗净根部的培养基,用800倍的多菌灵浸泡30 min后移栽至大棚内,大棚上层用遮光网遮盖,移栽的环境温度为25 ℃。 |