一种从紫草中分离出萘醌类有效成分的方法

摘要

本发明公开了一种从紫草中分离出萘醌类有效成分的方法，其步骤：A、将紫草干燥茎块烘干、用乙醇超声提取，超声，得到干浸膏；B、用溶剂石油醚和乙酸乙酯将乙醇干浸膏萃取，得到石油醚和乙酸乙酯萃取浸膏；C、将浸膏用等体积的乙酸乙酯超声溶解，蒸干至无乙酸乙酯气味，串联后的柱子接到中低压制备型色谱柱上；D、洗脱剂为石油醚，在中低压色谱柱的荧屏监控图下洗脱柱子，收集流份，得到化合物；E、将中低压制备色谱上串联，将化合物用甲醇溶解，化合物得纯化；F、化合物经过碱性反应产生紫色，无色亚甲蓝显色试验呈阳性。方法易行，操作简便，该方法是利用中低压制备色谱；高效分离抗癌活性成分的优化工艺，且含量在95%以上。

主权项

一种从紫草中分离出萘醌类有效成分的方法，其步骤是：A、将紫草干燥茎块烘干、粉碎后用乙醇超声提取，乙醇的倒入量为药材重量的5～10倍，置入超声仪中超声30～50min，再将超声后的物质过滤，回收过滤溶液中的溶剂，将回收的溶剂再倒入三角瓶，继续超声，重复本步骤3～5次，得到用乙醇提取的干浸膏；B、分别用溶剂石油醚和乙酸乙酯将乙醇干浸膏萃取，石油醚和乙酸乙酯的量为浸膏的4～7倍，反复萃取3～5次，至萃取液无色，分别将石油醚和乙酸乙酯萃取液过滤；回收过滤溶液中的溶剂，得到石油醚和乙酸乙酯萃取浸膏；C、将(A)和(B)步骤的浸膏用等体积的乙酸乙酯超声溶解，用其1～3倍量的400‑500目硅胶拌样，蒸干至无乙酸乙酯气味；取400ml、1500mL Flash柱各一个，400ml的柱装拌样硅胶，1500ml的柱仅装硅胶作为分离柱，二根柱都干法上样；分别用石油醚洗脱至柱平衡，再将二根柱串联，串联后的柱子接到中低压0.1～5兆帕制备型色谱柱上，中低压0.1～5兆帕制备色谱柱的制备条件为泵压力100‑200帕，流速100ml/min，检测器的监控波长为395nm，检测器的收集波长为280nm，死体积为7mL；D、洗脱剂的配方为：石油醚∶溶剂B∶0.2％甲酸＝49∶1∶0.1，其中溶剂B为乙酸乙酯∶丙酮＝4∶1的混合物，上述比例均为体积比；按洗脱剂为2％v/v，6％v/v，10％v/v的比例，在中低压色谱柱的荧屏监控图 下洗脱柱子，并收集流份，按监控图出现的谱峰收集，再以TCL检识辅助，取TCL检测紫色斑点中Rf值一致的流份，合并流分后得到六个粗的化合物；E、将中低压0.1～5兆帕制备色谱上串联的2根柱子换成C18柱、将六个粗品化合物分别用甲醇溶解，注入C18柱中，用不同梯度的甲醇‑水洗脱，收集流分，蒸干，六个化合物得到进一步的纯化；F、六个化合物经过碱性反应产生紫色，无色亚甲蓝显色试验呈阳性，说明为萘醌成分：碱性反应的方法25％w/vNa2CO3水溶液；4％v/vHCHO水溶液；5％v/v邻二硝基苯的苯溶液各1滴，加微量的化合物，混合后在水浴上加热至温度在50～70℃，1～4分钟内产生紫蓝色；G、经核磁共振谱、红外、质谱分析确证六个单体分别为去氧紫草素、紫草素、乙酰紫草素、β‑羟基异戊酰紫草素；异丁酰紫草素、β，β‑二甲基丙烯酰紫草素，并依次命名单体化合物为ZC I；ZCII；ZCIII；ZCIV；ZCIV；ZCVI，经高压液相色谱测试，六个化合物的纯度分别是ZC I为99.62％；ZCII为99.02％；ZCIII为99.5％；ZCIV为99.31％；ZC V为99.3％；ZCVI为99.2％。