蛋白分离和纯化

摘要

公开了纯化重组融合蛋白的方法，所述蛋白在宿主细胞中作为重组蛋白体样组装体(RPBLA)表达，在所述方法中提供以具有预定密度的RPBLA表达融合蛋白的转化宿主细胞的水性匀浆。形成所述匀浆的不同密度的区域，以提供含有浓度相对提高的RPBLA的区域和含有浓度相对匮乏的RPBLA的区域。从RPBLA浓度相对提高的区域中分离RPBLA匮乏的区域，从而纯化所述融合蛋白。然后可以根据需要收集所述RPBLA浓度相对提高的区域。

主权项

纯化在宿主细胞中以重组蛋白体样组装体表达的重组融合蛋白的方法，其中所述融合蛋白含有两个连接在一起的序列，其中一个序列是蛋白体诱导序列而另一个是目的产物的序列，所述蛋白体诱导序列包含谷醇溶蛋白或修饰的谷醇溶蛋白，所述方法包括步骤：(a)提供以重组蛋白体样组装体表达融合蛋白的转化宿主细胞的水性匀浆，所述重组蛋白体样组装体具有1.1g/ml至1.35g/ml的密度，其中一个序列是蛋白体诱导序列而另一个是目的产物的序列，所述蛋白体诱导序列包含谷醇溶蛋白或修饰的谷醇溶蛋白；(b)在没有加入的提供密度的溶质存在下或借助密度小于所述重组蛋白体样组装体密度的密度垫层离心所述匀浆，形成所述匀浆的不同密度的区域，以提供含有浓度相对提高的重组蛋白体样组装体的区域和含有浓度相对匮乏的重组蛋白体样组装体的区域；以及(c)将所述含有浓度相对匮乏的重组蛋白体样组装体的区域与所述含有浓度相对提高的重组蛋白体样组装体的区域分离，由此纯化所述融合蛋白；其中所述修饰的谷醇溶蛋白包括：(a)蛋白γ‑玉米醇溶蛋白的重复结构域6肽PPPVHL(SEQ ID NO：1)的一个或多个拷贝的序列，和(b)γ‑玉米醇溶蛋白的全部或部分ProX结构域的序列。