人成纤维细胞生长因子-21的聚乙二醇化学修饰物及其制备方法

摘要

本发明属于蛋白质修饰物领域，具体而言，本发明公开了人成纤维细胞生长因子-21的聚乙二醇化学修饰物，所述修饰物的活性是等摩尔量的未缀合的FGF-21的活性的40%以上。本发明还公开了该修饰产物的制备方法，其不但能制备该修饰产物，而且还能够回收未修饰的FGF-21。另外，本发明还公开了该修饰产物在制备用于调节糖代谢的药物中的应用。

主权项

一种人成纤维细胞生长因子‑21的聚乙二醇化学修饰物，其特征是由以下制备方法制备而得的，所述方法包括以下步骤：（1）将溶解于10mL 10mM、pH=6.0的PB缓冲液中的10mg FGF‑21与PEG分子量为5000Da的 mPEG‑马来酰亚胺以摩尔比1∶10混合，放置于4℃，避光反应2小时，加入1M甘氨酸1mL终止修饰反应；（2）将步骤（1）中的反应液，过20cm×1.5cm的Sephedax G‑25柱除盐：采用10mM pH=6.0的PB缓冲液平衡柱至基线平稳后，1mL/min流速上样，10mM PB缓冲液洗脱，收集第一个洗脱峰；（3）过Sephedax G‑25柱除盐后，上QAE‑Sephadex A50阴离子交换柱：用10mM PB缓冲液洗柱至基线平稳后，将除盐后收集到的蛋白上样，用含200mM NaCl的10mM PB 缓冲液洗脱，流速为1mL/min，收集洗脱峰，即为FGF‑21的PEG修饰物，用含500mM NaCl的10mM PB缓冲液洗脱，流速为1mL/min，收集洗脱峰，得未修饰FGF‑21蛋白，然后，将FGF‑21的PEG修饰物按步骤（2）的步骤过Sephedax G‑25柱除盐后，即得FGF‑21的PEG修饰物纯品。