从石蜡包埋组织中提取总RNA的方法

摘要

一种从石蜡包埋组织中提取总RNA的方法，该方法是在试剂盒的基础上所提出的改进方法，包括脱蜡、消化、提取和纯化的步骤。采用本发明的方法，可以提取出保存时间最长达6年的石蜡包埋保存的组织样品中的RNA，经过核酸微量测试仪和国际公认的Agilent 2100bioanalyzer分析，提取的浓度在211-3116ng/ul，提取纯度A260/280：1.75-2.04，都非常理想，可以进一步进行mRNA及miRNA水平的qRT-PCR和miRNA的microarray的高丰度基因的表达研究，这对于开展大量FFPE的基因研究提供了实验基础，具有广阔的应用价值。

主权项

从石蜡包埋组织中提取总RNA的方法，包括如下步骤：①脱蜡：将待处理的石蜡包埋组织切成厚度为20μm的组织片，取4片组织片置于无菌的1.5ml离心管内，加入1ml二甲苯，漩涡震荡混匀，50℃水浴3分钟，室温条件下，14000rpm，弃上清，重复操作1～3次；加1ml无水乙醇，混匀，室温条件下，14000rpm离心2～4分钟，弃上清，重复操作2次，用吸头挤压组织，尽量吸净组织中的乙醇，所得样品室温空气干燥15～30分钟；②消化：向步骤①所得样品中加入400ul消化缓冲液和4ul蛋白酶，55℃水浴30～150分钟；③提取：在480ul提取剂中加入1100ul无水乙醇，加入离心管中，用吸头反复吹打直到组织没有成团，90%的组织碎裂，呈白色云雾状为止；准备一个带滤柱的收集管，加700ul混合液，9000rpm离心30秒，再加剩余液体，再9000rpm离心30秒，弃滤液；加700ul洗液1，9000rpm离心30秒，加500ul洗液2/3，9000rpm离心30秒，弃滤液，再9000rpm离心30秒，弃滤液；④纯化：提前95℃水浴预热无核酸酶水，准备DNase混合液:6ul 10xDNA酶缓冲液，4ul DNA酶，50ul无核酸酶水；加60ul DNA酶混合液到滤柱中央，室温静置30分钟，加700ul洗液1室温静置30～60秒，9000rpm离心30秒，弃滤液，加500ul洗液2/3 9000rpm离心30秒，弃滤液，再加500ul洗液2/3，9000rpm离心60秒，弃滤液；用新的收集管，加60ul的预热的无核酸酶水，室温静置2～3分钟，12000rpm离心1分钟，反复收集一次。