用于哈氏弧菌的环介导恒温扩增快速检测试剂盒及方法

摘要

一种用于哈氏弧菌的环介导恒温扩增快速检测试剂盒，其组成为：反应液A，1支，其组成为：10×Lampbuffer，dNTP，硫酸镁水溶液，甜菜碱水溶液，引物vh-F3、vh-B3、vh-FIP、vh-BIP，BstDNA酶，10×荧光染料SYBRGreenⅠ，阳性对照试样，阴性对照试样和超纯水。本发明还涉及应用该试剂盒进行检测的方法。本发明试剂盒具有特异性强、灵敏度高、快速且成本低、操作方法更简单，适于水产养殖场现场快速检测。本发明方法解决了现有技术时间长、工作量大、交叉污染、操作复杂、需要复杂仪器等缺陷，为水产动物疾病检测提供了新的技术平台，能较好满足目前对哈氏弧菌引起的疾病的现场检测的迫切需要。

主权项

一种用于哈氏弧菌的环介导恒温扩增快速检测试剂盒, 其特征在于，其组成为： （1）反应液A，1支，其体积百分比组成为：①10×Lampbuffer，17%；其中Lampbuffer的组成为：200mM Tris‑HCl，100mM KCl，100mM (NH4)2SO4，20mM MgSO4，质量浓度1%的 Trition X‑100，Lampbuffer的pH为 8.8；②dNTP，16.5%，浓度为10mM；③硫酸镁水溶液，14%，浓度为25mM；④甜菜碱水溶液，26.5%，浓度为8mol/L；⑤vh‑F3，2.5%，浓度为10μM，上游外部引物vh‑F3为：CAA GAG CGACCA CTT CAT GT；⑥vh‑B3，2.5%，浓度为10μM，下游外部引物vh‑B3为：TTA GCG CTG CAC GGA AAC；⑦vh‑FIP， 10.5%，浓度为10μM，上游内部引物vh‑FIP为：TCG CGC TCA AAG TCG AAG TGG‑CAA GCG TTT GTT GAG CAC C；⑧vh‑BIP ，10.5%，浓度为10μM，下游内部引物vh‑BIP为：TCT CGG TAG AAG TGG CGA TGC A‑TCG CGT TGT GGG ATG TTG；（2）反应液B：8000U 的Bst DNA酶，1支；（3）反应液C：10×荧光染料SYBR GreenⅠ，1支；（4）哈氏弧菌基因组DNA的阳性对照试样，1支；（5）健康鱼组织总DNA的阴性对照试样，1支；（6）超纯水，1支。