用于鳗利斯顿氏菌的LAMP-LFD检测的引物和探针

摘要

本发明公开了鳗利斯顿氏菌的LAMP-LFD检测方法，包括鳗利斯顿氏菌empA基因克隆和测序步骤，设计三对LAMP的引物FIP、BIP、LF、LB、F3、B3和一条探针Van-HP步骤，其中Van-FIP为5’端生物素标记引物，探针Van-HP为5’端异硫氰酸荧光素FITC标记探针，配制含三对引物和样品模板的LAMP反应体系步骤，对LAMP反应体系扩增步骤，用探针杂交然后用LFD检测步骤，本发明具有比现有技术的PCR检测鳗利斯顿氏菌的方法具有更高的灵敏度、特异性和便捷性，并且可以在实际生产中现场应用，有利于检测和控制水产动物养殖中鳗利斯顿氏菌的感染和暴发。

主权项

一种用于鳗利斯顿氏菌的LAMP‑LFD检测的引物和探针，其特征在于包括LAMP的三对引物序列和一条探针序列：FIP引物Van‑FIP：5’‑GCTGGTTGAGCTTGCGACCGTTTTGGGTTACAAGGTACGCGAA‑3’ 44BIP引物Van‑BIP：5’‑TCGATCAGTTTGGGCTCAGGTGTTTTAAGTGGTTGGTTTGCTGC‑3’44LF引物Van‑LF：5’‑AGGTATAGAAGGCTTCGGAG‑3’          20LB引物Van‑LB：5’‑GCTGATTTGTATGTCAAAGCC‑3’         21F3引物Van‑F3：5’‑CCAACGGGGAATGTGCTAG‑3’           19B3引物Van‑B3：5’‑GGCGACAATCCCACGAAG‑3’            18探针Van‑HP：5’‑ACCAGCGCTAAAGTTTCGATC‑3’           21其中Van‑FIP为5’端生物素标记引物，探针Van‑HP为5’端异硫氰酸荧光素FITC标记探针；引物序列和探针序列分别与鳗利斯顿氏菌的empA基因上相应位置核苷酸序列相同或者互补。