动物血液样品中痕量烟草特有N-亚硝胺（TSNAs）的分析方法

摘要

一种动物血液样品中痕量烟草特有N-亚硝胺的分析方法，其特征在于：将动物血液样品放入加有EDTA-k2饱和水溶液的离心管内，10000rpm离心，取上层血浆加入NNN-d4、NNK-d4、NAT-d4、NAB-d4、NNAL-d3混合内标溶液，静置30min沉淀蛋白后，取上层液过滤，采用LC-MS/MS分析检测样品中烟草特有N-亚硝胺的含量。本发明的优点在于：能准确测定动物血液复杂基质样品中烟草特有N-亚硝胺（TSNAs）及其代谢物的含量，与现有技术相比具有操作简单，灵敏度高，结果可靠的特点，开创了一种新的用于动物血液复杂基质样品中烟草特有N-亚硝胺（TSNAs）及其代谢物测定的方法。

主权项

一种动物血液样品中痕量烟草特有N‑亚硝胺的分析方法，其特征在于：将动物血液样品放入加有乙二胺四乙酸二钾（EDTA‑k2）饱和水溶液的离心管内，10000 rpm离心，取上层血浆加入NNN‑d4、NNK‑d4、NAT‑d4、NAB‑d4、NNAL‑d3混合内标溶液，静置30 min沉淀蛋白后，取上层液过滤，采用LC‑MS/MS分析检测样品中烟草特有N‑亚硝胺的含量，具体步骤如下：a、动物血液样品收集；b、混合内标溶液配制：以同位素标记物NNN‑d4、NNK‑d4、NAT‑d4、NAB‑d4、NNAL‑d3作为内标物，配制浓度均为50 ng/mL的混合内标溶液；c、混合标准溶液配制：分别称取NNN、NNK、NAT、NAB、NNAL，配制具有浓度梯度的NNN、NNK、NAT、NAB、NNAL系列混合标准溶液，并各加入1ml浓度为50ng/ml的混合内标溶液；d、          标准曲线绘制：将NNN、NNK、NAT、NAB、NNAL系列混合标准溶液按由低到高浓度顺序进行HPLC‑MS/MS分析，并以各烟草特有N‑亚硝胺与其内标的峰面积比Y对其相应的浓度X，浓度单位为ng/mL，进行线性回归分析，得到烟草特有N‑亚硝胺的工作曲线回归方程和相关系数；e、          样品前处理：将动物血液样品放入加有0.1 mL乙二胺四乙酸二钾（EDTA‑k2）饱和水溶液的1.5 mL离心管内，10000 rpm离心，取上层血浆0.5 mL加入0.5 mL 浓度为50ng/ml的混合内标溶液，静置30 min沉淀蛋白后，取上层液过滤，进行HPLC‑MS/MS分析； f、数据处理和分析，对动物血液中痕量烟草特有N‑亚硝胺及其代谢产物进行检测，揭示烟草特有N‑亚硝胺在动物体内的代谢规律。