用于制备抗凡纳滨对虾红体病的卵黄抗体的灭活疫苗制法

摘要

一种用于制备抗凡纳滨对虾红体病的卵黄抗体的灭活疫苗制法，该方法先将病原副溶血弧菌JGB080708-1菌株灭活、离心得灭活菌体；然后制得黄芪浸出液；再由白油、硬脂酸铝、司班80制得油相，灭活菌体与黄芪浸出液混合制得疫苗水相；最后将油相和水相按体积比2:1混合乳化研磨5min，制得黄芪和白油为联合佐剂的副溶血弧菌油乳剂灭活疫苗。本发明副溶血弧菌油乳剂灭活疫苗，可以用于免疫成年产蛋鸡，进而得到抗凡纳滨对虾红体病的高免卵黄抗体，能增强凡纳滨对虾对病原副溶血弧菌的免疫力，提高凡纳滨对虾养殖的成活率，增加凡纳滨对虾养殖的产量，提高凡纳滨对虾养殖生产的经济效益。从根本上解决了目前凡纳滨对虾养殖生产过程中易发生副溶血弧菌所致疾病的问题。

主权项

一种用于制备抗凡纳滨对虾红体病的卵黄抗体的灭活疫苗制法，其特征在于：它以经甲醛溶液灭活后的凡纳滨对虾红体病的病原副溶血弧菌JGB080708‑1（Vibrio parahaemolyticus）作为免疫原，以白油、司班80、硬脂酸铝作油乳剂，以及以黄芪浸出液作为免疫增强剂，乳化制备成油乳剂灭活疫苗；其具体步骤如下：（1）将病原副溶血弧菌JGB080708‑1菌株接种在普通营养琼脂肉汤培养基上，28‑30℃摇床培养24h，加入体积终浓度0.3%的甲醛28℃灭活48h，离心得灭活菌体；（2）取黄芪用蒸馏水浸泡30‑60min后煎煮，过滤，浓缩至终浓度为原药1g/mL，得黄芪浸出液；（3）将白油加热至50‑55℃，加入硬脂酸铝，硬脂酸铝与白油的重量体积比为1‑3：100 g / ml，继续加热至65‑70℃，加入司班80，司班80与白油的体积比为5‑7：100，直至终温度115‑120℃，维持15‑20 min，制得油相，冷却备用；（4）将灭活菌体与黄芪浸出液混合，制得疫苗水相；水相中病原副溶血弧菌JGB080708‑1免疫原为1011cells/mL，黄芪浸出液为1g/mL，水相中还加入了终体积浓度为4%的吐温80；（5）将油相和水相按体积比2:1混合乳化研磨5min，制得黄芪和白油为联合佐剂的副溶血弧菌油乳剂灭活疫苗。