降低小麦胚乳中PPO和PSY基因表达水平的方法及其专用RNAi载体

摘要

本发明公开了一种降低小麦胚乳中PPO和PSY基因表达水平的方法及其专用RNAi载体。本发明提供了由表达盒A和表达盒B串联组成的表达盒C；表达盒A含有启动子A、PPO基因干涉片段的反向互补序列、间隔序列A、PPO基因干涉片段和终止子A；表达盒B含有启动子B、PSY基因干涉片段、间隔序列B、PSY基因干涉片段的反向互补序列和终止子B。本发明将具有干涉PPO和PSY基因功能的发卡结构，分别置于胚乳特异性启动子之下，然后将具有独立干涉PPO和PSY基因的表达盒进行融合，形成具有双干涉功能的RNAi载体。在实际应用中，通过一个基因转化过程，就可实现PPO和PSY基因的同步沉默。为利用基因工程技术改良小麦面粉的白度，提高小麦加工品质提供有力的工具。

主权项

由表达盒A和表达盒B串联组成的表达盒C；所述表达盒A含有启动子A、PPO基因干涉片段的反向互补序列、间隔序列A、PPO基因干涉片段和终止子A；所述表达盒B含有启动子B、PSY基因干涉片段、间隔序列B、PSY基因干涉片段的反向互补序列和终止子B；所述表达盒A为如下(1)或(2)：(1)自上游至下游依次包括如下元件：所述启动子A、所述PPO干涉基因片段的反向互补序列、所述间隔序列A、所述PPO基因干涉片段和所述终止子A；(2)自上游至下游依次包括如下元件：所述启动子A、所述PPO基因干涉片段、所述间隔序列A、所述PPO基因干涉片段的反向互补序列和所述终止子A；所述表达盒B为如下(3)或(4)：(3)自上游至下游依次包括如下元件：所述启动子B、所述PSY基因干涉片段、所述间隔序列B、所述PSY基因干涉片段的反向互补序列和所述终止子B；(4)自上游至下游依次包括如下元件：所述启动子B、所述PSY基因干涉片段的反向互补序列、所述间隔序列B、所述PSY基因干涉片段和所述终止子B；所述PPO基因干涉片段的序列如序列表的序列2自5’末端第1至454位核苷酸所示；所述PSY基因干涉片段的序列如序列表的序列3所示；所述间隔序列A和所述间隔序列B的序列均如序列表的序列1自5’末端第12至586位核苷酸所示；所述启动子A和所述启动子B均为序列表的序列4自5’末端第1至1910位核苷酸所示；所述终止子A和所述终止子B均为序列表的序列4自5’末端第3463至3720位核苷酸所示。