使用未经加工的血液的PCR和HLA分型的方法

摘要

本发明提供了使用串联PCR过程扩增兴趣基因或RNA或其组的方法。第一PCR或PCR反应的组中的引物是基因座-特异性的。第二PCR或PCR反应的组中的引物特异于基因座-特异性引物的亚序列并且在第二PCR扩增期间全部耗尽。对于RNA扩增，第一PCR是逆转录，并且获得的cDNA为cRNA合成、终点PCR或实时PCR提供模板。本发明还提供的是基因或其组的等位基因分型的方法，该方法通过在含有样本的DNA或RNA上使用串联PCR来扩增基因、将获得的扩增子或其组与具有基因相关等位基因变异的序列的探针进行杂交。指示杂交的可检测信号对应着基因的等位基因型或者基因的组的等位基因型的组。

主权项

一种用于扩增兴趣DNA的方法，包括：获得包括DNA的未经加工的样本；在未经加工的样本上进行第一PCR来产生第一扩增子；稀释第一扩增子；以及就此进行第二PCR直到第二PCR反应中所用的所有引物被耗尽，来产生第二扩增子，从而将输入样本DNA扩增到最终扩增的DNA产物浓度，这受到第二PCR反应中引物浓度的限制，所述第二PCR反应不依赖于包括原始样本的DNA的量或纯度。