一种高纯度、高增殖力、高细胞毒活性的CIK细胞的制备方法

摘要

本发明属于体外细胞培养技术领域，具体是一种高纯度、高增殖力、高细胞毒活性的CIK细胞的制备方法。该制备方法是：采集并分离患者外周血单个核细胞，先经Mini MACS免疫磁珠去除CD4+CD25+Treg细胞，分选得到CD3+、CD4+、CD8+的T细胞；将得到的细胞置于含有植物血凝素(PHA)的培养液中，使悬浮液中的PHA浓度为100ng/ml，37℃、5％CO2的培养条件下孵育24h后，移至经CD3单抗(1μg/ml)包被的细胞培养瓶中，加入IFN-γ(1000U/ml)，48h后加入IL-2(500U/ml)、IL-21(100ng/ml)，4天后补充含有亚硒酸钠(0.005mg/L)的培养基继续培养7-14天，即可得到高纯度、高增殖力、高细胞毒活性的CIK细胞。本发明提高了体外扩增的CIK细胞的数量、活性和纯度，使CIK抗肿瘤作用增强。

主权项

一种高纯度、高增殖力、高细胞毒活性的CIK细胞的制备方法，其特征在于：采集并分离患者外周血单个核细胞，先经Mini MACS分选去除CD4+CD25+Treg细胞，得到CD3+、CD4+、CD8+的T细胞；将得到的细胞置于含有PHA、IFN‑γ的培养液中，使悬浮液中的PHA浓度为100ng/mL，37℃、5％CO2的培养箱中孵育24h后，移至浓度为1μg/mL的CD3单抗包被的细胞培养瓶中，加入IFN‑γ使其终浓度为1000U/mL，48h后加入IL‑2、IL‑21，使其终浓度分别为500U/mL、100ng/mL，4天后补充含有亚硒酸钠的培养基，使亚硒酸钠终浓度为0.005mg/L，继续培养7‑14天，即可得到高纯度、高增殖力、高细胞毒活性的CIK细胞；所述的培养基是指GT‑T551人淋巴细胞培养液或RPMI1640培养液。