目标诱导链释放和限制性内切酶酶切循环的信号放大技术建立及赭曲霉素A的检测

摘要

本发明实施例公开了一种基于目标诱导链释放和限制性内切酶酶切循环的新型信号放大技术和化学发光检测赭曲霉素A的方法。将赭曲霉素A适体(DNA1)和赭曲霉素A适体互补序列(DNA2)固定于磁珠表面，在赭曲霉素A存在时，DNA1与赭曲霉素A作用，导致DNA2从磁珠表面脱落；经过磁性分离后，将DNA2与聚合模板DNA3杂交，形成部分互补DNA双链，在DNA聚合酶Phi29的作用下，DNA2沿着模板DNA3生长，从而形成完全互补的双链DNA；生成的双链DNA的一条链被限制性内切酶Nb.BbvCI切割，从而生成一条短链DNA；被切割的DNA形成一个新的生长点，并在聚合酶Phi29和限制性内切酶Nb.BbvC的作用下，继续进行生长和切割，由于生长和切割的不断进行，从而产生大量的短链DNA；再利用DNA和化学发光试剂标记的化学发光纳米粒子为探针对该短链DNA进行测定，实现赭曲霉素A的测定。

主权项

基于目标诱导链释放和限制性内切酶酶切循环的信号放大技术建立及其在赭曲霉素A超灵敏度检测中的应用，其特征包括以下步骤：(a)首先，将适体和适体互补序列固定在磁珠表面，在有目标物存在时，适体互补序列从磁珠表面脱落。经磁性分离后，将适体互补序列与模版DNA杂交，在DNA聚合酶的作用下，适体互补序列会沿着模版生长，形成完全互补双链DNA。(b)将步骤(a)的生成的双链DNA用切割酶切割，得到一条短链DNA，同时得到新的生长位点，在聚合酶酶和切割酶的作用下，生长和切割会不断进行产生大量短链DNA。(c)将(b)所得短链DNA用化学发光探针进行测定，从而实现对目标物的检测。