一种基因C型鸭甲型肝炎病毒定性和定量检测方法

摘要

本发明公开了一种基因C型鸭甲型肝炎病毒定性和定量检测方法，采用一对特异性引物，包括：上游引物DHAV-C FP、下游引物DHAV-C RP；以cDNA为模板，以优化的反应体系和条件进行PCR，扩增位于DHAV-C2C基因4639～4832位点的194bpDHAV-C特异片段，在所述检测的最佳反应体系和反应条件测得Ct值，即可实现对DHAV-C的定性；再由预先建立的荧光定量RT-PCR标准曲线获得所求病毒浓度。本发明可用于DHAV-C感染的快速诊断，并能对被检样本病毒荷载量进行准确定量，具有灵敏度高、特异性强、重复性好、高通量和易于标准化的优点。

主权项

一种基因C型鸭甲型肝炎病毒定性和定量检测方法，采用一对特异性引物，包括：上游引物DHAV‑C FP、下游引物DHAV‑C RP；以cDNA为模板，扩增194bp的目的片段，进行荧光定量PCR检测，所述检测的最佳反应体系为20μL，包括：SYBR Green I master mix 10μL；上下游引物各0.4μL；DNA模板2μL，补充去离子水至20μL；反应条件为95℃预变性3min；95℃变性15s；60℃退火31s，进行30个循环，得到Ct值，即可实现对被检测样本的定性检测；由预先测定的荧光定量标准曲线方程可获得所检测基因C型鸭甲型肝炎病毒拷贝数，实现对被检样本进行定量。