过滤染色计数细胞的方法及装置

摘要

本发明公开了一种过滤染色计数细胞的方法及装置，准备好体积相同的需要计数的实验组细胞和至少4组已知数量的标准组细胞悬液，分别进行过滤，使用磷酸盐缓冲液清洗细胞并采用结晶紫溶液浸泡，吸去结晶紫溶液后用磷酸盐缓冲液清洗细胞，再用醋酸溶液冲洗后收集滤液，测量570nm波长处光密度；结合标准组已知细胞数量与光密度绘制标准曲线，最后根据标准曲线和实验组细胞样品的光密度计算实验组细胞数量。本发明体现了减少主观度数因素对结果的影响，易于实现自动化批处理，以提高测定精度及结果平行性的有益效果。

主权项

一种过滤染色计数细胞的方法，其特征在于包括下述步骤：1)准备好需要计数的未知数量的实验组细胞和至少4组已知数量的标准组细胞悬液，各组细胞悬液的体积相同；2)每个细胞悬液样品对应一个过滤装置，分别将各组细胞悬液通过过滤装置，使细胞截留在滤膜之上；3)分别使用细胞悬液2倍以上体积的磷酸盐缓冲液清洗截留在过滤装置上的细胞；4)分别加入细胞悬液1倍以上体积的浓度为0.1％～1％的结晶紫溶液于过滤装置中浸泡细胞10分钟～1小时；5)分别吸去结晶紫溶液，用细胞悬液5倍以上体积磷酸盐缓冲液清洗过滤装置中的细胞；6)分别排出过滤装置中残存液体；7)分别用细胞悬液1倍以上体积的浓度为3％～30％的醋酸溶液冲洗过滤装置，收集滤液；8)分别将所得滤液经稀释3倍体积以上后，使用可见分光光度计，测量570nm波长处光密度；9)结合标准组已知细胞数量与光密度绘制标准曲线，得到光密度I标准与细胞数量N标准的关系公式：I标准＝a×N标准+b，其中a为一元线性相关系数，b为截距，皆通过标准曲线计算得知；10)根据标准曲线和实验组细胞样品的光密度计算实验组细胞数量，即N实验＝(I实验‑b)/a。