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<p>Ce brevet concerne l'isolement de la totalité du gène lipase d'une nouvelle souche de champignon thermophile talaromyces thermophilus. Ce gène comprend une phase de lecture ouverte de 1080 pb, interrompue par trois introns de petites tailles et qui code pour une protéine mature de 269 Aa avec une masse moléculaire théorique d'environ 29590 Da. Le site catalytique représenté par le triplet Ser, Glu et His ainsi que le motif caractéristique Gly-X-Ser-X-Gly qui entoure la Ser catalytique est bien conservé pour cette lipase. Cette enzyme appartient à la famille des lipases Mucorales. L'analyse bio informatique de la région promotrice de ce gène a permis de prédire les différentes séquences basales du promoteur à savoir des boites TATA, CAAT… etc. d'autre part, plusieurs sites potentiels non spécifiques des lipases Cre A, Pac C et Hap 2-3 connus pour réguler l'expression de certaines protéines respectivement en fonction de la source du carbone, du pH et de l'oxygénation. D'autres séquences consensus de sites de fixation de facteurs de transcription spécifiques des lipases ayant été identifiés tels que ORE et FARE l'analyse par Southern Blot, dans des conditions stringentes, de l'ADN génomiques e T. thermophilus indique la présence d'un seul gène est plus forte sur son de blé que sur huile d'olive, substrat classique de l'induction des lipases. Cette lipase est thermo-alkaline et présente une bonne stabilité à la dénaturation thermique, elle maintient plus de 90% et de 60% de son activité après une incubation de 60 min à 55°C et à 60°C respectivement. L'immobilisation de cette enzyme par liaison covalente sur le chitosane a conduit à l'amélioration de sa thermostabilité. Cette lipase immobilisée a été exploitée dans des réactions d'estérifications pour la synthèse d'un additif utilisé dans les biofuels, l'oléate de butyle. Cette enzyme peut être utilisée aussi pour réaliser des réactions de transétérification (réaction entre un ester et un alcool) et d'interéstérification (réaction entre deux esters).</p> |
