一种低温碱性蛋白酶及其制备方法

摘要

本发明涉及一种低温碱性蛋白酶及其制备方法，属于用重组DNA技术定点突变野生型碱性蛋白酶基因，以改善其特性，并将突变后基因与大肠杆菌-枯草芽孢杆菌穿梭质粒pBE2S连接，将其在枯草芽孢杆菌中高效表达的方法，涉及具有适冷性及碱稳定性的低温碱性蛋白酶及其制备方法。本发明解决了碱性蛋白酶在低温环境下活性较低，以致应用受限的问题。其技术方案是从微生物特别是嗜碱芽孢杆菌分离野生型碱性蛋白酶基因，对其Glu110、Glu134的氨基酸残基进行突变，经在枯草芽孢杆菌中高效表达，检测其发酵液酶活力达到1985U/mL，在40℃下，该低温碱性蛋白酶(Glu110&134Ala)比野生型碱性蛋白酶活力提高了28％；在10℃下，比野生型碱性蛋白酶活力提高了62％。

主权项

一种低温碱性蛋白酶，其特征在于：是通过如序列7所示的核苷酸序列编码的野生型碱性蛋白酶氨基酸序列中Glu110和Glu134的氨基酸位点替换，得到如序列8所示的核苷酸序列，经宿主细胞枯草芽孢杆菌高效表达后获得低温碱性蛋白酶。