一种辛德毕斯病毒XJ-160缺陷型复制子及其构建方法和应用

摘要

本发明提供一种辛德毕斯病毒XJ-160缺陷型复制子及其构建方法和应用，其构建包括：XJ-160病毒质粒型复制子载体pVa-XJ的构建；含报告基因的XJ-160质粒型复制子pVaXJ-EGFP和pVaXJ-GLUC的构建；XJ-160缺陷型复制子的构建：利用Acl I限制性内切酶分别单酶切pVaXJ-EGFP和pVaXJ-GLUC，构建非结构基因处存在1139个碱基缺失的缺陷型质粒pVaXJ-EGFPΔ和pVaXJ-GLUCΔ。本发明的机理是：由于非结构基因区域存在部分缺失，该缺陷型复制子导入细胞后报告基因不能正常大量表达，而当细胞中存在甲病毒感染时，病毒表达的非结构蛋白可以弥补并反式作用于缺陷型复制子导致报告基因的大量表达。本XJ-160缺陷型复制子能够检测多种甲病毒，对于非甲病毒无反应，特异性高；具有较高灵敏度，可以检测到1PFU的病毒；操作简单快速，所需仪器少；可持续性强，检测时不需杀死病毒，适于快速监别甲病毒。

主权项

一种辛德毕斯病毒XJ‑160缺陷型复制子pVaXJ‑EGFPΔ，其特征在于：其序列为：GACTCTTCGC GATGTACGGG CCAGATATAC GCGTTGACAT TGATTATTGA CTAGTTATTA  60ATAGTAATCA ATTACGGGGT CATTAGTTCA TAGCCCATAT ATGGAGTTCC GCGTTACATA  120ACTTACGGTA AATGGCCCGC CTGGCTGACC GCCCAACGAC CCCCGCCCAT TGACGTCAAT  180AATGACGTAT GTTCCCATAG TAACGCCAAT AGGGACTTTC CATTGACGTC AATGGGTGGA  240CTATTTACGG TAAACTGCCC ACTTGGCAGT ACATCAAGTG TATCATATGC CAAGTACGCC  300CCCTATTGAC GTCAATGACG GTAAATGGCC CGCCTGGCAT TATGCCCAGT ACATGACCTT  360ATGGGACTTT CCTACTTGGC AGTACATCTA CGTATTAGTC ATCGCTATTA CCATGGTGAT  420GCGGTTTTGG CAGTACATCA ATGGGCGTGG ATAGCGGTTT GACTCACGGG GATTTCCAAG  480TCTCCACCCC ATTGACGTCA ATGGGAGTTT GTTTTGGCAC CAAAATCAAC GGGACTTTCC  540AAAATGTCGT AACAACTCCG CCCCATTGAC GCAAATGGGC GGTAGGCGTG TACGGTGGGA  600GGTCTATATA AGCAGAGCTC TCTGGCTAAC TAGAGAACCC ACTGCTTACT GGCTTATCGA  660AATTAATACG ACTCACTATA GGGAGACCCA AGCTGGCTAG CATTGACGGC GTAGTACACA  720CTATTGAATC AAACAGCCGA CCAATAGCAC TACCATCATA ATGGAGAGGC CTGTAGTTAA  780CGTAGACGTA GACCCCCAGA GTCCGTTTGT CGCTCAACTG CAAAAGAGCT TCCCGCAATT  840CGAGGTAGTA GCACAGCAGG CCACACCAAA TGACCATGCT AATGCCAGAG CATTTTCGCA  900TCTGGCTAGT AAATTAATCG AGCTGGAGGT TCCTACCACA GCGACGATTT TGGACATAGG  960CAGCGCACCG GCTCGTAGAA TGTTTTCCGA GCACCACTAT CACTGCGTCT GCCCTATGCG  1020GAGCCCCGAA GATCCCGACC GTATGATGAA ATACGCCAAT AAGTTGGCGG AGAAGGCAAA  1080TAAGATTACT AATAAAAATT TGCATGAGAA GATTAAAGAC CTCCGGATCG TACTCGATAC  1140TCCGGATGCT GAGACACCGT CGCTCTGCTT CCATAATGAC GTTACCTGCA GTACGCGTGC  1200AGAGTACTCC GTTATGCAAG ATGTGTATAT TAATGCACCC GGAACTATTT ACCATCAAGC  1260TATGAAAGGC GTGCGGACAC TTTACTGGAT TGGGTTTGAC ACCACTCAGT TCATGTTCTC  1320GGCTATGGCA GGATCATATC CTGCCTATAA TACTAACTGG GCCGATGAAA AAGTCCTTGA  1380AGCACGCAAT ATTGGACTCT GTAGTACCAA GTTGAGCGAA GGCCGTATAG GAAAGTTGTC  1440AATAATGAGG AAAAAGGAGT TGAAGCCCGG GTCACGGGTC TACTTCTCAG TGGGATCAAC  1500ACTCTACCCA GAATATAGGG ACAGCTTACA GAGCTGGCAC CTCCCATCAG TGTTCCATCT  1560GAAAGGAAAG CAATCGTATA CATGCCGCTG TGATACAGTG GTAAGTTGCG AAGGCTACGT  1620AGTGAAGAAG ATCACTATTA GTCCCGGGAT TACGGGAGAA ACCGTGGGAT ACGCGGTTAC  1680AAACAATAGC GAGGGTTTCT TGCTATGTAA AGTTACTGAC ACAGTAAAAG GGGAACGGGT  1740CTCGTTCCCC GTGTGCACGT ATATCCCGGC CACCATATGC GACCAGATGA CAGGTATAAT  1800GGCCACGGAT ATTTCACCTG ACGATGCACA GAAGCTTCTG GTTGGGCTCA ACCAGAGGAT  1860TGTCATTAAC GGTAAAACCA ACAGGAACAC TAACACCATG CAAAACTACC TTCTACCGAT  1920TATAGCACAA GGCTTCAGCA AGTGGGCTAA AGAGCGCAAA GAAGATCTTG ATAATGAAAA  1980GAAGCTGGGC ACTAGGGAGC GTAAGCTTAT TTACGGGTGT CTATGGGCGG TTCGTACTAA  2040GAAAGTGCAC TCGTTTTACC GCCCGCCCGG AACGCAGACC AGCGTGAAAG TCCCGGCATC  2100TTTTAGCGCT TTTCCAATGT CATCTGTATG GACAACCTCA CTACCCATGT CGCTGAGGCA  2160GAAGATAAAA TTGGTACTAC AACCGAAAAA GGAGGAGAAA TTACTGCAGG TCTCAGAAGA  2220GTTAGTTGCG GAGGCTAAAG CGGCCTTTGA AGATGCACAG GAGGAGATCA GAGCGGAGCA  2280ACTCCGTGAA GCACTTCCAC CACTGGTAGC AGACAAAGGT ATTGAAGCCG CTGCAGAAGT  2340 CGTCTGTGAA GTGGAAGGGC TTCAAGCTGA TATAGGAGCA GCTCTTGTTG AGACGCCACG  2400AGGGCATGTA AGGATTATAC CTCAAGTAAC AGACCGCATG ATTGGGCAGT ACATCGTGGT  2460CTCACCAACC TCCGTGCTTA AGAACGCCAA ATTAACACCT GTTCACCCTT TGGCTGACCA  2520AGTCAAAATT ATAACACATT CAGGGAGGAC AGGAAGATTC GCGGTGGAGC CGTATGATGC  2580TAAAGTGTTG ATGCCAGCAG GTAGCGCCGT TCCATGGCCT GAGTTCCTGG CGTTAAGTGA  2640AAGCGCCACG CTAGTGTATA ACGAAAGAGA ATTTGTCAAC CGCAAACTTT ACCATATCGC  2700CATACATGGT CCCGCGAAGA ATACTGAAGA GGAGCAGTAT AAAGTCACTA AAGCCGAACT  2760CGCAGAAACA GAGTATGTAT TTGATGTCGA CAAGAAGCGT TGCGTTAAGA AGGAAGAGGC  2820CTCGGGGCTG GTTCTCTCGG GAGAACTAAC TAACCCACCG TATCATGAAA TGGCGCTTGA  2880GGGGCTGAAG ACTCGACCCG CTGTTCCGTA TAAGGTCGAA ACAATAGGAG TAATAGGCAC  2940ACCAGGATCA GGCAAGTCTG CGATTATTAA ATCGACCGTT ACCGTACGAG ATCTTGTTAC  3000CAGCGGAAAG AAGGAAAACT GCCGTGAAAT TGAAACTGAC GTGTTGAGGT TGAGAGGTAT  3060GCAGATCACG TCAAGGACGG TAGACTCAGT CATGCTTAAC GGATGCCATA AAGCCGTTGA  3120GGTGCTATAC GTTGATGAAG CATTTGCGTG CCATGCTGGT ACGTTGCTTG CCTTGATCGC  3180TATTGTTAGA CCCCGAAAGA AGGTAGTACT TCGCGGGGAT CCTAAGCAGT GTGGTTTTTT  3240CAATATGATG CAGCTCAAAG TACATTTTAA TCACCCTGAA AAAGATATAT GTACTAAGAC  3300GTTTTACAAA TTCATCTCTC GACGCTGCAC GCAACCAGTA ACGGCGATTG TTTCAACACT  3360TCATTACGAC GGAAAGATGA AGACTACAAA CCCCTGCAAG AAGAGCATTG AGATAGATAT  3420TACAGGTACT ACGAAGCCGA AGCCCGGGGA CCTCGTTTTG ACGTGCTTCC GCGGATGGGT  3480CAAGCAGCTA CAGATCGATT ACGCGGGAAA TGAAGTGATG ACGGCTGCTG CCTCGCAGGG  3540ACTGACTAGA AAGGGTGTTT ACGCCGTTCG GCAAAAAGTT AATGAGAATC CACTGTACGC  3600GATTACGTCG GAGCACGTGA ACGTGTTACT CACCCGTACT GAGGATAGAT TAGTGTGGAA  3660GACCTTACAG GGCGATCCAT GGATCAAACA ACTTACTAAC ATTCCGAAAG GAAACTTCCA  3720AGCTACTATT GAGGACTGGG AAGCTGAACA TAAGGGGATC ATCGCTGCAA TAAACAGCCC  3780AACCCCTCGT ATAAACCCGT TCAGCTGTAA GACTAATGTG TGCTGGGCGA AGGCACTGGA  3840ACCGATACTG GCCACAGCCG GTATTGTCCT CACCGGTTGC CAGTGGAGTG AGCTGTTTCC  3900ACAGTTCGTA GATGATAAAC CCCACTCAGC TATCTACGCC CTAGATGTGA TTTGTATTAA  3960GTTCTTTGGT ATGGATCTGA CAAGCGGTCT ATTTTCAAAG CAGAGCATCC CTCTGACGTA  4020CCACCCTGCG GACTCTGCAA GGCCAGTGGC GCATTGGGAC AACAGTCCAG GAACCCGAAA  4080GTATGGATAC GATCATGCGG TTGCTGCCGA ATTGTCTCGT AGATTCCCGG TGTTCCAACT  4140TGCTGGAAAA GGCACACAGC TTGACTTGCA GACTGGTAGA ACCAGAGTCG TTTCCGCGCA  4200GTG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