一种超声波介导的微生物遗传转化方法及其应用

摘要

一种低频超声波介导的转化微生物的方法，步骤为：1)在液体培养基中培养细菌至对数期；2)在含有步骤1中的液体培养基的玻璃瓶中加入待转化的底物；3)将步骤2中的玻璃瓶放入超声波仪器的空腔内；4)启动超声波仪器，频率0.1-1000千赫，功率0.01-1000特，采用非探头式接触，整个转化过程在生物反应器的溶液中进行，连续可调或间歇式超声波；5)细胞复苏、转接、涂平板。本发明可以对单个细胞、单个反应器操作，也可以实现高通量，而且操作简单，随意控制，并可以实现远程遥控。

主权项

一种低频超声波介导的转化微生物的方法，包括如下主要步骤：1)将嗜热厌氧乙醇杆菌接种到已除氧的RCM培养基，60℃厌氧培养，待菌液长至对数期，此时细胞浓度应为109cells/mL；RCM培养基的配方：酵母膏3g/L，牛肉膏10g/L，蛋白胨10g/L，可溶性淀粉1g/L，葡萄糖5g/L，半胱氨酸盐酸盐0.5g/L，NaCl 3g/L，NaAc3g/L，琼脂0.5g/L，刃天青2mg/L，加蒸馏水补至总体积为1L，调整pH值为6.8，通N2除氧，115℃湿热灭菌15min；RCM固体培养基配制：琼脂1.25％，其它同RCM培养基，培养瓶为底部完全扁平的玻璃瓶；2)在含有步骤1)中的液体培养基的玻璃瓶中加入分子量为70kDa的德克萨斯红标记的葡聚糖为待转化的底物；3)将步骤2)中的玻璃瓶放入超声波仪器的空腔内；4)启动超声波仪器，频率40千赫，功率19瓦特，采用非探头式接触，整个转化过程在玻璃瓶的溶液中进行，连续可调或间歇式超声波，时间20秒；5)细胞复苏、转接、涂平板。